8981基因转化旱稻品种纯合体鉴定及分析

发布时间：2020-05-29 02:31

【摘要】：本课题选用8981基因为目的基因,通过农杆菌转化法将目的基因转入植物基因组中,本课题主要进行后期鉴定,利用除草剂、PCR、生理筛选、Southern杂交以及Tail-PCR等技术,最终获得能够稳定遗传的转基因旱稻新品系。具体研究结果有以下几点:(1)候选纯合株系的筛选在试验田采用浓度为0.8mg/mL的草铵膦进行喷洒,筛选出97个具有抗除草剂的抗性株系进行PCR鉴定,筛选出候选纯合株系93个,杂合株系4个。(2)抗性株系鉴定及突变体筛选将筛选出的93个候选纯合株系,通过NaCl胁迫后得到8个比野生型耐盐性强的株系、PEG胁迫后得到7个比野生型抗旱性强的株系、极限实验筛选出高抗除草剂的株系93个以及目前最高的除草剂耐受浓度8mg/mL;并获得了具有特殊农艺性状的矮杆株系6个以及籽粒饱满的株系33个。(3)Southern杂交分析本实验采用地高辛试剂盒进行Southern杂交,从25个株系中筛选出了能够稳定遗传的单拷贝转基因株系2个;二拷贝转基因株系12个;多拷贝转基因株系11个。(4)TAIL-PCR分析目的基因的插入位点将得到的能够稳定遗传的2个单拷贝转基因株系2-9-5、2-19-5分别进行TAIL-PCR鉴定,确定了株系2-9-5目的基因的插入位点在10号染色体Os10g0351500基因中,此基因编码Tyrosine protein;株系2-19-5目的基因的插入位点在1号染色体Os01g0884300基因中,此基因编码NAW protein。
【图文】：

图 2-1 质粒的提取草剂抗性筛选2 所示，分别表示株系未经除草剂喷洒前及经除草剂2-7-4、2-8-1 经 0.8mg/mL 草铵膦喷洒后 8d，植株WT）对照组植株全部死亡，如图 2-2 所示，可以表；但是 3-2-1 株系有个别植株叶片出现变黄、干枯、如图 2-2 所示。

图 2-1 质粒的提取抗除草剂抗性筛选 2-2 所示，分别表示株系未经除草剂喷洒前及经除草剂喷洒后的生1-3、2-7-4、2-8-1 经 0.8mg/mL 草铵膦喷洒后 8d，植株更壮，并无死（WT）对照组植株全部死亡，如图 2-2 所示，可以表明 2-1-3、2-7系；但是 3-2-1 株系有个别植株叶片出现变黄、干枯、死亡，说明，如图 2-2 所示。
【学位授予单位】：河北科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S511.6

【参考文献】

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本文编号：2686242