原发性肝癌中MEN1基因的突变体筛查及其蛋白稳定性研究

发布时间：2020-06-05 01:24

【摘要】：原发性肝癌是临床常见的恶性肿瘤,其中约90%为肝细胞肝癌(HCC)。在全球范围内,其发病呈上升趋势。据流行病学统计,我国男性和女性肝癌的发生率和死亡数均居世界前列。MEN1编码610个氨基酸的蛋白质menin,其过去被认为是一种抑癌基因。而进一步研究发现,HCC中menin表达量上调,且表达量与肿瘤大小相关。本实验室之前的一项研究从表观遗传学的角度初步阐明了menin在HCC中的促癌机制,证明其表达水平增高与肝癌的发生,发展,侵袭及转移密切相关。基因突变可能导致蛋白质结构和功能的改变,促进肿瘤的进展,而MEN1突变在HCC中的作用尚没有被阐明。本实验室对49例HCC患者的癌组织样本的MEN1基因进行测序,发现位于其外显子9和外显子10的多个点突变。通过生物信息学方法我们初步研究了其中的三个错义点突变对蛋白质结构与稳定性的影响。进一步在逆转录病毒载体上构建了MEN 野生型及点突变的质粒;构建了稳定表达野生型及突变体menin的细胞模型;验证了突变体的蛋白稳定性。通过收集HCC患者及正常人血液样本,提取血液DNA并测序统计,试图找到点突变与临床症状间的潜在联系。本研究结果主要包括:(1)我们在HCC中筛选出集中在外显子9及外显子10多个MEN1基因点突变;(2)三个错义突变体蛋白表达量与拷贝数及转录水平无明显相关性。转录大致相同时,3个突变体menin蛋白表达水平不同,但均较野生型高;(3)蛋白质结构预测、蛋白质稳定性实验结果证明:突变体G503D的蛋白稳定性与野生型相似;L551P稳定性差;P595LC端和N端的稳定性不同。(4)HCC患者血液中MEN1 C1784T杂合突变率约90%,显著高于肝癌组织(约2%)及正常人血液(约2%)。以上研究表明:HCC中MEN1突变可能存在热点区域;MEN1错义突变影响了蛋白质表达水平及稳定性且meninC端对于其稳定性起到重要的作用;MEV1错义突变与临床表现之间存在一定关系,特定点突变在不同部位及人群中的分布差异可能成为肿瘤早期诊断及治疗的靶点。
【图文】：

世界范围,死亡率

图１世界范围肝癌发生率及死亡率：Ａ，肝癌发生率；Ｂ，肝癌死亡率逡逑

肝癌,治疗方案,个体化治疗

更有可能产生积极的结果，并降低第三阶段研究的持续负面风险｜３９４３］。以上理论逡逑为目前肝癌的系统化，个体化治疗的方案基础。综上所述，，目前可采用的肝癌治逡逑疗方案（图２）。逡逑Ｍａｄｉｃａｉ邋ｔｒｅａｉｒｎｇｎｔ逦Ｓｕｒｏｔｏａｌ邋ｔｆ逡逑ｍＳ＾ＳＳｍ逡逑ｃａｒＭＭＭ＊＊邋ｌｏｒ邋ｋｖ？＞逡逑ｉｒａｎａｐｔｅｎｌ邋0（邋ｒＭｅｃａｏｎ逡逑＂（Ａ－逦—邋ｗｅ逡逑Ａ逡逑ＶＳｉｉＬｌＳ逡逑图２邋Ｈ前肝癌可选治疗方案总结Ｌ逡逑５逡逑
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7

【参考文献】