胃癌中SPARC基因异常甲基化及其意义的研究

发布时间：2020-06-05 15:30

【摘要】：目的:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,由于缺乏有效的早期检测指标,胃癌患者就诊发现时往往处于进展期或晚期。近年来,随着分子生物技术的完善,国内外大量学者开始从遗传学和表观遗传学两个层面深入探究胃癌发病的机制,其中表观遗传学已然成为目前主流的研究方向。它是指是在不改变DNA序列的情况下获得遗传表型变异,涵盖了DNA甲基化、基因沉默等。大量研究表明抑癌基因启动子区发生甲基化改变,将会导致胃癌的发生和发展。本研究旨在探讨SPARC基因在胃癌不同细胞株和组织中的表达水平,分析其表达情况是否和某些临床病理特征之间存在关系;研究SPARC基因启动子区甲基化状态及其对胃癌患者临床病理特征的影响;再通过质粒转染技术过表达SPARC基因,观察其对胃癌细胞产生的生物学功能影响,明确SPARC基因对胃癌细胞生物学功能的调控作用。方法:1.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常人胃黏膜细胞株GES-1,和4株胃癌细胞株,66对配对样本中的表达水平;2.采用甲基化特异性PCR(MSP)检测在4株胃癌细胞和66对配对样本组织中SPARC基因启动子区是否存在异常甲基化,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系;并使用去甲基化药物5-氮杂胞苷和乙酰化抑制剂TSA处理低表达胃癌细胞BGC-823,对处理后的细胞中SPARC基因表达水平和启动子区的甲基化状态分析。3.构建SPARC基因稳定过表达转染胃癌细胞BGC-823后,CCK-8检测细胞增殖能力,划痕法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,Transwell小室方法检测细胞侵袭能力的改变。结果:1.qRT-PCR的结果显示:与正常胃黏膜细胞和非癌组织相比,在胃癌细胞和组织中SPARC基因的表达水平明显下降(P0.05),且与患者的Borrmann分型(P=0.015)、TNM分期(P=0.001)和有无淋巴转移(P=0.001)密切相关。2.MSP结果显示在胃癌细胞和组织中SPARC基因的启动子区分别存在不同程度的甲基化状态的改变,而这些改变与胃癌患者的Borrmann分型(P=0.002)、TNM分期(P=0.001)和有无淋巴转移(P=0.001)有关。使用药物处理后发现,单独运用去甲基化药物后细胞的表达水平和启动子区甲基化状态得到一定程度的逆转,而单独运用乙酰化抑制剂后并无明显变化,联合用药与单独使用去甲基化药物的结果一致。3.通过过表达SPARC质粒载体,构建稳定转染的胃癌细胞BGC-823。采用CCK-8、划痕法、流式细胞仪和Transwell等技术检测转染后的胃癌细胞BGC-823生物学功能。结果表明:SPARC基因可抑制胃癌细胞株BGC-823的增殖、迁移、侵袭和周期,和促进细胞凋亡。结论:1.SPARC基因在胃癌细胞株和癌组织中呈低表达状态。2.SPARC基因在胃癌细胞和组织中低表达状态受其启动子区甲基化的影响,且与患者的Borrmann分型、TNM分期和有无淋巴结转移密切相关,使用去甲基化药物5-Aza-Cdr可以恢复其表达水平和逆转其甲基化状态。3.SPARC基因可以明显抑制胃癌细胞BGC-823的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。4.SPARC基因参与调控胃癌发生、发展,在总个过程中起到抑癌基因的作用。
【图文】：

和B四株胃癌细胞及正常胃黏膜细胞中SPARC基因mRNA和蛋白相对表达量C

10图 1C 八对胃癌组织及配对的癌旁正常组织中 SPARC 基因蛋白表达量图中 N 表示癌旁非癌组织，T 表示癌组织，*表示 P<0.05。.2 胃癌和癌旁配对组织中基因 SPARC 的表达水平和临床病理学特之间的关系。我们采用 qRT-PCR 技术对 66 对筛选出来的胃癌组织和与其配对的癌旁非癌组
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.2

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本文编号：2698246