芍药PlSAURs基因的克隆及对拟南芥的遗传转化

发布时间：2020-06-11 14:59

【摘要】：本试验以芍药吸胀前(PIB)、吸胀后(PIA)、露白(PDA)、长芽(PUA)四个时期的杂交种子(♀‘粉玉奴’×♂‘粉玉楼’)作为试验材料,成功从芍药种子中获得PlSAURs基因的cDNA全长,然后将构建成功的表达载体借助农杆菌介导的方法导入拟南芥植株中,为进一步了解PlSAURs基因对休眠与萌发的作用奠定了良好的基础。本试验主要结果如下:1、为了研究PlSAURs基因在芍药种子萌发不同关键期表达量的变化,分别提取种子四个关键时期的总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR技术对PlSAURs基因进行表达量检测,结果表明,PlSAUR1在露白时期表达量最高,PlSAUR2在长芽时期表达量最高,PlSAUR3在长芽时期表达量最高,PlSAUR4在吸胀后时期表达量最高。这也为最终确定PlSAURs基因克隆植物材料最适时期的选取奠定理论基础。2、通过PCR扩增技术,成功从芍药种子里克隆得到PlSAURs基因:PlSAUR1开放阅读框的全长是495 bp,共编码164个氨基酸;PlSAUR2开放阅读框的全长是381 bp,共编码126个氨基酸;PlSAUR3开放阅读框的全长是300 bp,共编码99个氨基酸;PlSAUR4开放阅读框的全长是558 bp,共编码185个氨基酸。将所得PlSAURs基因的氨基酸序列分别与NCBI数据库中已提交的植物氨基酸序列进行比对,选取相似度和序列覆盖度高的同源序列,进行多序列的同源性比对和进化树构建,并利用在线软件对PlSAURs的蛋白质结构等生物信息学进行分析。3、将获得的PlSAURs基因编码区插入pBI121的植物表达载体中,借助农杆菌介导法获取拟南芥转基因植株。通过在DNA、RNA水平上对转基因植株的检测表明,PlSAURs基因已经被成功转入拟南芥植株中。
【图文】：

图 2-1 芍药种子总 RNA 电泳检测Figure 2-1 Electrophoresis detection of total RN合成第一链 cDNA琼脂糖凝胶电泳进行 cDNA 的质量验证得的条带均在 200 bp 左右，符合预期，且比较成功，可以用于后续试验。图 2-2 反转录获得的 cDNAFigure 2-2 Detection of cDNA100 bp→250 bp→500 bp→750 bp→1000bp→2000bp→

第二章 PlSAURs 基因表达分析图 2-1 芍药种子总 RNA 电泳检测Figure 2-1 Electrophoresis detection of total R录合成第一链 cDNA%的琼脂糖凝胶电泳进行 cDNA 的质量验证所得的条带均在 200 bp 左右，，符合预期，且录比较成功，可以用于后续试验。28→18→
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S682.12;Q943.2

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1 费日雯;芍药PlSAURs基因的克隆及对拟南芥的遗传转化[D];沈阳农业大学;2018年

本文编号：2708073