慢病毒载体介导Apelin基因转染对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

发布时间：2020-06-29 09:05

【摘要】：研究目的使用慢病毒载体介导Apelin基因转染胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞,观察Apelin基因对该细胞葡萄糖摄取的影响。研究方法(1)使用0.5mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、1μM地塞米松和10μg/ml胰岛素共同作用3T3-L1前脂肪细胞,将其诱导为成熟脂肪细胞,油红“O”染色鉴定;(2)TNF-α刺激诱导建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型,葡萄糖摄取试剂盒检测鉴定;(3)通过基因亚克隆建立携带Apelin基因的慢病毒载体重组质粒,利用HEK293T细胞包装收集慢病毒液,将浓缩后的病毒液感染胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞,(1)提取细胞内RNA,利用RT-PCR反应验证Apelin基因水平表达(2)提取细胞内蛋白,利用Western Blot实验验证Apelin蛋白水平表达(3)使用葡萄糖摄取试剂盒检测葡萄糖摄取值的变化。研究结果(1)油红“O”染色结果证实80%以上3T3-L1前脂肪细胞成功诱导为成熟脂肪细胞;(2)TNF-α使胰岛素刺激的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取值降低32.7%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);(3)将Apelin基因转染至胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞后,(1)RT-PCR反应验证转染Apelin基因组成功扩增出Apelin基因片段(2)Western Blot实验验证转染Apelin基因组细胞内8Kd左右出现明显蛋白条带,而未转染的对照组中未出现明显蛋白条带(3)葡萄糖摄取实验验证转染Apelin基因组葡萄糖摄取值显著增长达42.2%,与未处理的对照组对比,差异具有显著统计学意义(P0.01)。研究结论慢病毒载体介导Apelin基因成功转染胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞后,该细胞内葡萄糖摄取值明显增加,从而改善胰岛素抵抗。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4

【参考文献】

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本文编号：2733692