TIM-4基因多态性与冠心病的相关性研究

发布时间：2020-07-06 22:42

【摘要】：研究背景:冠心病(Coronary Atherosclerotic Heart Disease,CHD)是由多个基因和环境因素长期相互作用所致的复杂性疾病,严重威胁人类健康。在西方发达国家,其年死亡数可占总死亡人数的1/3左右,近30年来,我国CHD发病率和死亡率迅速增高,占心脏病死亡数的50%～75%。CHD是一种慢性炎症性疾病,在动脉粥样硬化斑块的形成中,单核-巨噬细胞系统起着复杂而决定性的作用。另外,病变中富含淋巴细胞,提示炎症和免疫应答在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用。此外,CHD具有家族聚集性,属于遗传性疾病。近几年,在世界范围内运用全基因组关联研究的方法分析发现了一系列有关CHD的基因或变异,至2017年全世界医学研究共发现六十多个CHD相关的易感基因,其中包括CXCL12、CCDC92、IL-6、MPO、TNF-α等免疫相关基因。TIM(T-cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule)基因家族是McIntire等人在2001年研究哮喘易感基因时发现的一个影响T细胞分化的基因家族,与糖尿病、哮喘等多种免疫性疾病相关。人TIM家族包括3个成员TIM-1、TIM-3和TIM-4。TIM-1和TIM-3主要表达在Th细胞,而TIM-4主要表达在巨噬细胞和树突状细胞表面,TIM-4是TIM-1的天然配体。近几年的研究显示,作为磷脂酰丝氨酸的受体,TIM-4可以通过与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合,促进巨噬细胞等对凋亡细胞的吞噬。因此,TIM-4不仅能调节T细胞的增殖和活化,而且能增强巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力,进而维持机体内环境的稳定。研究发现,TIM-4基因多态性与哮喘、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等多种疾病相关,但TIM-4基因多态性与CHD之间的关系目前尚不清楚,国内外的研究也鲜有报道,尚待进一步的研究。目的:本课题以CHD及TIM-4基因为研究对象,通过对比分析CHD患者及健康对照个体sTIM-4血清水平及TIM-4基因SNP之间的差异,分析TIM-4 SNP与CHD患者各临床指标的相关性,明确TIM-4与CHD易感性及疾病严重程度的关系,为CHD的诊断、治疗及预后评估提供新的候选靶点。方法:收集CHD患者组及健康对照组抗凝全血及血清,整理分析年龄、性别、吸烟、喝酒、血清脂质水平等相关资料。1.利用TIANGEN全血基因组DNA提取试剂盒来提取外周血基因组DNA。2.根据rs 7700944和rs 6882076多态性位点设计特异性引物,利用实时定量PCR的方法进行基因分型,计算基因型和等位基因频率。3.应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测健康对照组和CHD患者血清中sTIM-4的水平。4.统计分析健康对照组和CHD组rs 7700944和rs 6882076两个位点的基因型和等位基因频率的差异,分析CHD患者组及健康对照组血清sTIM-4水平的差异、CHD中rs 7700944位点不同基因型的个体血清sTIM-4的水平差异,进一步分析rs 7700944不同基因型与CHD患者高血压、糖尿病及血脂和冠脉评分的关系。结果:1.CHD患者组与健康对照组比较,吸烟和喝酒的比例较高。在血脂代谢方面,CHD患者的甘油三酯(TG)比较高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比较低,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和总胆固醇(TC)之间没有统计学差异。2.CHD患者组与健康对照组比较,rs 6882076位点基因型与等位基因频率无显著性差异,rs 7700944位点基因型和等位基因分布频率差异有统计学意义,TIM-4基因rs 7700944 AA纯合型较不易患CHD。3.CHD患者血清中sTIM-4的表达水平较健康对照组明显降低。相比其他基因型,rs 7700944 AA纯合型的CHD患者中血清sTIM-4水平高于其他基因型的患者。4.CHD患者中,rs 7700944不同基因型在TC、TG、HDL-C、LDL-C无明显差异。在冠脉Gensini评分中,AA基因型要高于GG型,而与GA型无统计学差异。5.CHD患者血清sTIM-4水平与甘油三酯呈正相关,未发现与血脂其他指标、Gensini评分的相关性,在AA基因型的CHD患者中也未发现sTIM-4与Gensini评分的相关性。在CHD中,未发现rs 7700944位点不同基因型与糖尿病和高血压发病的相关性。结论:1.CHD患者外周血sTIM-4表达水平降低,提示sTIM-4可能有利于阻止CHD的发生。2.TIM-基因rs 6882076位点与CHD的发生无关,rs 7700944位点与CHD的发生有关,rs 7700944 AA纯合型较不易患CHD。3.TIM4基因rs 7700944 AA纯合型的CHD患者血清中sTIM-4的水平高于其他基因型的患者,但其Gensini评分高于GG型的患者,并且CHD患者血清sTIM-4与甘油三酯的水平呈正相关。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4
【图文】：

甘油三酯,冠脉,无相关,正相关

尸＝０．２２２）并无相关性，与冠脉Ｇｅｎｓｉｎｉ评分（Ｐ＝０．２２０）也没有相关性，而逡逑与甘油三酯（ＴＧ，Ｐ＝０．０２３）正相关，随着ｓＴＩＭ－４浓度的升高，甘油三酯轻度逡逑升高（图１．２）。逡逑１９逡逑

熔解曲线,熔解温度,基因型,标本

ＱＰＣＲ扩增后两ＡＣＴ值相同或接近（根据实验两者差值小于２，多数逡逑小于１），有单峰的熔解图形和特定的熔解温度，该标本基因型为杂合型（如逡逑图２．１）；野生型扩增管ＡＣＴ值小于突变型扩增管（据实验差值大于６，多数逡逑大于１０），有相近的熔解或不同的熔解温度，该标本基因型为野生纯合型；相逡逑反基因型为突变纯合型（如图２．２）。逡逑Ｍｅｌｔ邋Ｃｕｒｖａ逡逑？？逦Ｉ逡逑ｒｔ逦逦逦逦逦一＾逦？逡逑图２．１杂合型（具有相同的ＡＣＴ、熔解曲线和熔解温度）逡逑Ｆｉｇ．２．１邋Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ邋ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋ｗｉｔｈ邋ｓａｍｅ邋ＣＴ邋ｖａｌｕｅ，邋ｍｅｌｔｉｎｇ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ逡逑ＭｅＳＣＨｒｖｅ逡逑Ｉ；＊逦，邋）邋ｗ逡逑图２．２纯合型（具有不同的ＡＣＴ、熔解曲线和熔解温度）逡逑Ｆｉｇ．２．２邋Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ邋ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＣＴ邋ｖａｌｕｅ，邋ｍｅｌｔｉｎｇ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ逡逑ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ逡逑３６逡逑

熔解曲线,熔解温度,基因型,标本

【参考文献】