肿瘤易感基因101在白斑综合征病毒感染对虾过程中的功能研究

发布时间：2020-07-22 04:44

【摘要】：细胞内体分选转运复合物(ESCRTs)主要由5个部分(ESCRT-0,-Ⅰ,-Ⅱ,-Ⅲ和Vps4)组成,能够参与多种生物学过程。ESCRT-Ⅰ的一个亚基,肿瘤易感基因101(TSG101)能够参与多种病毒进入细胞,细胞中转运以及释放的过程。然而,TSG101是否参与白斑综合征病毒(WSSV)侵染宿主的过程,还尚未可知。本研究中,我们首次在日本囊对虾中鉴定出了一种TSG101,命名为MjTSG101。经WSSV刺激后,MjTSG101在mRNA与蛋白水平上都存在明显的上调变化。通过注射双链RNA的方法干扰MjTSG101之后抑制了病毒的复制,反之,“过表达”MjTSG101之后,病毒复制量上升。也就是说,WSSV能够利用MjTSG101促进自身的复制。同时,在WSSV刺激之后,几种能够与MjTSG101相互作用的ESCRT组分(Vps28,Hrs和Alix)的表达水平明显上升。说明这几种组分能够协同MjTSG101参与WSSV感染宿主细胞的过程。随后,我们采用免疫细胞化学的方法观察发现,MjTSG101与WSSV能够共定位,并且干扰MjTSG101之后,早期和晚期内体的标志分子(Rab5和Rab7)表达量下降,同时分别干扰Rab5和Rab7之后,WSSV含量下降,说明MjTSG101能够通过影响早期和晚期内体相关途径促进WSSV在对虾体内的转运过程。接下来,观察WSSV刺激之后MjTSG101的亚细胞定位变化发现,感染病毒24h之后,MjTSG101向细胞膜附近聚集,这就意味着MjTSG101可能在WSSV侵染过程的晚期发挥作用。随后,我们在对虾体内注射N16(一种依赖于TSG101的HIV-1组装和出芽抑制剂),发现病毒的复制量明显下降。说明WSSV能够利用MjTSG101以及与其相互作用的某些ESCRT组分来帮助自身完成病毒粒子的释放。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S945.4
【图文】：

图１．１果蝇的先天免疫体系（Ｇｏｌｄ邋ａｎｄ邋Ｂｒｕｃｋｎｅｒ，邋２０１５）。逡逑Ｆｉｇ．邋１．１．邋Ｉｎｎａｔｅ邋ｉｍｍｕｎｅ邋ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ邋ｉｎ邋Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ．逡逑１逡逑

３．２血淋巴的凝集作用逡逑血淋巴的凝集是甲壳类动物先天免疫体系的组成部分，能够有效阻止血细逡逑胞的流失以及外来病原微生物在宿主体内的扩散。研究表明，甲壳动物血细胞中逡逑含有谷氨憸胺转移酶（ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅｓ，ＴＧ），ＴＧ能够介导凝结蛋白（ｃｌｏｔｔａｂｌｅ逡逑ｐｒｏｔｅｉｎｓ，邋ＣＰｓ）多聚化从而激活宿主体内血淋巴凝集作用。ＴＧ能够促进凝结素逡逑（ｃｏａｇｕｌｉｎ）与丨丨ＩＩ细胞表面一种叫作ｐｒｏｘｉｎｓ的抗原交叉联合，从而形成一种能够逡逑阻挡入侵物质的生理屏障（Ｏｓａｋｉｅｔａｌ．．邋２００２）。２００７年，在中国明对虾中克隆得逡逑到一种新型的谷氨酰胺转移酶（ＦｃＴＧ），研究发现，它在对虾免疫中发挥着重要逡逑的作用。逡逑３．３酚氧化酶原的激活逡逑黑化作用在对虾先天免疫应答过程中占有举足轻重的地位，由它产生的黑逡逑色素能够隔离并杀死病原微生物。黑化作用由以下三个部分组成：病原识别、一逡逑

个铜离子结合基序，不同的是，它还含有一段推测的信号肽序列以及类似于硫逡逑酯样基序的代替物（Ｍａｓｕｄａ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０１２）。斑节对虾中酚氧化酶原的激活过程及逡逑其与其他相关途径的交集如图１．３所示。逡逑Ｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｔ＞ａｃｔｅｒｉａ逡逑（ＴＯＮ）逡逑Ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ邋ｂａｃｔｅｒｉａ逡逑？逦（ＬＰＳ）逡逑ＰｍｐｒｏＷａｓＳＰＨ邋１逦／逦＿邋＿逡逑（ＰＧＲＰ？）逦／逡逑７逦0－Ｇｌｕｃａｎ）逡逑？逦ＰｍＬＧＢＰ逡逑＊逦Ｚ逡逑Ｕｎｋｎｏｗｎ逡逑Ｓ？ｎｒｖｅ邋Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ逡逑Ｃａｓｃａｄｅ逡逑Ｐｍｐｆ0ＰＰＡＥ２逦Ｉ逦Ｐ／ｎＭａｓＳＰＨ１逡逑ｍ３逦＊逦０邋ＰｍＰＰＡＥ２逦ＡＭＰｓ逡逑■邋？邋逦邋■■邋■邋■逦邋－逡逑ｌ邋Ｊ逦：？＊邋ｒ逦邋ＰｍＰｅｎ３逡逑ＰｍｐｒｏＰＰＡＥＩ逦ＰｍＰＰＡＥＩ逦＿邋＿＿邋ＴｔｏＨ邋ｐａｔｈｗａｙ逦ＣｒｕｓｔｉｎＰｍｌ逡逑一一邋－＿逦ＣｔｖＳ＇ｔｉｋｅＰｍ逡逑／逡逑／逡逑ＰｍＰＯＺ邋Ｉ逡逑？。Ｐ０２邋＿逦＾邋b\0？逦？？逡逑ＰｍｐｒｏＰＯｌ邋＾｜｜逦Ｔ逡逑ＰｍＰ０１逦Ｉ邋Ｍｅｌａｎｉｎ逡逑ＰｍＰａｃｒｆａｓｔｉｎ－ｌｉｋＢ逦Ｐ／ｔｊＭＩＰ逡逑ＰｍＳｅｒｐｉｎ３逡逑ＰｍＳｅｒｐｉｎｆｌ逡逑图１．３斑节对奸中酌氧化酶原的激活过程及其与其他相关途径的交集

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本文编号：2765342