【摘要】：目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)占口腔颌面部恶性肿瘤的90%,是最常见的恶性肿瘤。目前经治疗后OSCC的5年生存率也仅为50%-60%。近几年随着肿瘤免疫学研究的深入,人们认识到肿瘤的免疫逃逸导致了机体对肿瘤的免疫无应答或免疫反应低下,通过对肿瘤免疫逃逸机制的了解,对临床的免疫治疗,预后判断及疗效评价具有很大的指导意义。第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(Phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)是迄今发现的第1种具有双特异性磷酸酶活性的肿瘤抑制基因,通过发挥磷酸酶作用,参与调控细胞内诸多重要的信号通路,其中包括PI3K/AKT信号通路。研究发现,在人类多种肿瘤中包括口腔鳞癌均发现有PTEN的低表达或不表达等失活现象,其表达情况与肿瘤的发生发展及预后有一定的相关性。本研究使用PTEN表达不同的两种口腔鳞癌细胞株和一种正常口腔黏膜细胞株,采用分子生物学的实验方法和技术,检测免疫抑制因子(IL-6,IL-10,VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的表达;使用PI3K/AKT信号通路抑制剂干预后,检测免疫抑制因子(IL-6,IL-10,VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的浓度变化。探讨PTEN失活后口腔鳞癌免疫逃逸的具体作用途径和分子靶点;揭示PTEN失活在口腔鳞癌免疫逃避中作用和分子机制。材料与方法:1.实验材料口腔鳞癌细胞株SCC-4:购置于美国ATCC公司口腔鳞癌细胞株Tca8113:购置于上海九院正常口腔黏膜细胞株HGFs(正常对照,来源于正常牙龈组织):来源于本院病理研究室2研究方法2.1采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和蛋白印迹法(WesternBlot)检测三种细胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs)中PTEN蛋白的表达情况。2.2采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测三种细胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs)中免疫抑制因子(IL-6,IL-10和VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的含量。2.3使用PI3K的抑制剂(LY294002)干预三种细胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs),采用ELISA检测干预后免疫抑制因子(IL-6,IL-10和VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的表达变化情况。结果:1.免疫组化和Western Blot检测结果均显示正常口腔黏膜细胞株HGFs中PTEN蛋白为正常表达,口腔鳞癌细胞TCa8113中PTEN蛋白为中表达,口腔鳞癌细胞SCC-4中PTEN蛋白为低表达;2.ELISA结果显示HGFs、TCa8113和SCC-4中的免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)浓度依次升高,且每两种细胞之间均有显著性差异(P0.05);3.ELISA结果显示HGFs、TCa8113和SCC-4中的共刺激分子(B7-H1)浓度依次升高,且每两种细胞之间均有显著性差异(P0.05);4.使用PI-3K抑制剂LY294002干预后,HGFs、TCa8113和SCC-4中的免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)浓度均降低,SCC-4降低最为显著(P0.05);5.使用PI-3K抑制剂LY294002干预后,HGFs、TCa8113和SCC-4中的共刺激分子(B7-H1)浓度降低,且SCC-4降低最为显著(P0.05).6.三种细胞中PTEN与IL-6、IL-10、VEGF和B7-H1相关性分析:PTEN与IL-6、IL-10、VEGF和B7-H1浓度呈明显负相关,r值分别-0.985、-0.97、-0.945、-0.975,P0.05。结论:1.PTEN基因的低表达可以引起免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)的表达增多,从而导致鳞癌逃避机体免疫监视。2.PTEN基因的低表达可以引起共刺激分子(B7-H1)的表达增多,从而促进鳞癌的免疫逃逸。3.PTEN基因对于免疫抑制因子和共刺激分子的调控为负调节作用,是通过信号通路PI3K/AKT实现的。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.8
【图文】：
1 PTEN 在正常口腔黏膜细胞株 HGFs 中的表达情况（免疫组化，×.1 Expression of PTEN in normal oral mucosal cell line HGFs（IHC，×
1 PTEN 在正常口腔黏膜细胞株 HGFs 中的表达情况（免疫组化，×.1 Expression of PTEN in normal oral mucosal cell line HGFs（IHC，×
3 PTEN 在口腔鳞癌细胞株 SCC-4 中的表达情况（免疫组化，×40ig.3 Expression of PTEN in oral squamous cell line SCC-4（IHC，×4HGFs TCa8113 SCC-41 2 3 4 5 6PTENGAPDH 4 三种细胞株(HGFs、TCa8113 和 SCC-4)中 PTEN 蛋白的 WB 结
【参考文献】
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3 Michael Roggendorf;;Immunostaining of PD-1/PD-Ls in liver tissues of patients with hepatitis and hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2011年28期
4 张银粉;周航;;肿瘤的免疫逃逸机制研究进展[J];免疫学杂志;2011年04期
5 安俊平;朱正秋;;PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞SGC7901生长的研究[J];辽宁医学院学报;2010年06期
6 陈培;张钦宪;;PTEN-PI3K/AKT细胞信号转导通路与肿瘤[J];癌变·畸变·突变;2010年06期
7 史继静;刘朝奇;;PD-1及其配体PD-L在HIV感染中的作用[J];生命的化学;2010年03期
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9 张建华,杨为民,周四维;PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87凋亡的影响[J];医学研究生学报;2005年11期
10 周强,伍烽,朱学强,张军,李莉,王智彪;高强度聚焦超声对恶性肿瘤患者外周血免疫抑制因子的影响[J];中国临床康复;2005年06期
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1 董肖婷;抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及对人舌鳞癌SCC-4细胞增殖的影响[D];辽宁医学院;2013年
本文编号：
2779040
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