乌头属植物中毒事件文献分析及乌头剧毒特性BAHD候选基因蛋白表达分析

发布时间：2020-08-06 21:22

【摘要】：乌头属(Aconitum L.)植物是我国重要的传统中药材,应用历史悠久,具有显著的强心、镇痛、抗炎等药理作用,但因其具有剧毒特性而应用受到极大限制。通过炮制等方法可减轻乌头毒性,但不能彻底解决乌头毒性。长久以来,民间存在利用乌头属植物食疗治疗疾病传统,中毒事件在我国各地频繁发生。本研究通过对近年乌头属植物中毒事件文献分析,共统计中毒案例5593例,中毒事件主要发生于云南(38.62%)及四川(10.37%)等地,中毒原因主要为饮用酒剂(20.17%)及治病或食疗(13.82%)。因此,探究减毒存效和保证乌头属植物用药安全、有效、可控是亟待解决的问题。乌头二萜生物碱是乌头发挥药理作用的重要基础物质,其骨架上C_8位乙酰酯和C_(14)位苯甲酰酯与乌头的剧毒性紧密相关,而BAHD酰基转移酶是催化酯基合成的关键终端酶,因此找到乌头中催化乌头生物碱骨架上酯基形成的主要BAHD基因,是解决乌头毒性问题的关键。本研究以乌头属代表植物——乌头(Aconitum carmichaelii)的BAHD候选基因为实验材料,通过原核表达、体外酶活分析等对乌头候选BAHD基因进行功能鉴定,主要研究结果为:从乌头BAHD酰基转移酶候选基因中筛选得关键候选基因6个,构建得关键候选基因原核表达菌5个,通过异源表达成功诱导出5个关键候选基因的蛋白,优化获得最佳表达条件28℃、4 h、0.5 mM IPTG,以优化表达条件诱导乙酰酯候选基因AcBAHD6、AcBAHD17及苯甲酰酯候选基因AcBAHD21获得蛋白,以酰基供体乙酰辅酶A和苯甲酰辅酶A、酰基受体苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和乌头原碱为底物,进行酶促反应,但均未检测到预期产物。本研究构建得异源表达菌及诱导出乌头关键BAHD候选基因异源蛋白,为鉴定其它候选基因及找到乌头剧毒特性关键BAHD基因奠定基础,以期为解决乌头剧毒性及创造乌头低毒高效新种质资源具有重要意义。
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S567;R595
【图文】：

乌头炮制减毒水解机制

BAHD酰基转移酶催化机制Fig.1-2CatalyticmechanismofBAHDacyltransferase

乌头二萜生物碱酯基形成预测图

【参考文献】

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本文编号：2782983