胶原三螺旋重复蛋白1（CTHRC1）基因沉默对胶质母细胞瘤上皮间质转化及细胞迁移的影响

发布时间：2020-08-31 14:13

　　 目的:通过RNA干扰技术抑制胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)基因,研究其对胶质母细胞瘤上皮间质转化及肿瘤细胞迁移的影响,为临床胶质母细胞瘤的靶向治疗及其预后提供理论依据。方法:1、收集46名胶质母细胞瘤患者的病理组织及16名非肿瘤患者的正常皮质组织,用定量逆转录聚合酶链反应技术即qRT-PCR(Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)和蛋白质印迹法(Western blot技术)检测这两种组织中CTHRC1基因m RNA和蛋白质的表达水平。2、购买人类正常星形胶质细胞株1800及人类胶质瘤细胞株U-118MG、U-87MG、U-373MG,用qRT-PCR和Western blot技术检测以上四种细胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白质的表达水平。3、将U-87MG细胞株分成三组,用脂质体2000介导CTHRC1-si RNA质粒、对照质粒处理细胞株,得到CTHRC1-si RNA组、对照组,并单独用脂质体2000处理U-87MG细胞株,进行空白对照。用qRT-PCR和Western blot技术检测三组细胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白质的表达水平。4、对转染的三组U-87MG细胞株进行细胞增殖及迁移实验,检测三组细胞株细胞的增殖及迁移能力。5、用qRT-PCR和Western blot技术检测转染的三组U-87MG细胞株细胞中上皮性标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和间质标记物N钙黏蛋白(N-cadherin)及Snail、Slug基因的m RNA和蛋白质表达水平。6、用Western blot技术测定三组U-87MG细胞株中β连环素(β-catenin)的表达水平。结果:1、胶质母细胞瘤组织中CTHRC1基因m RNA和蛋白质的表达水平明显高于正常皮质组织。2、U-373MG、U-118MG、U-87MG细胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白质表达的水平显著高于正常人星形胶质细胞株1800。3、CTHRC1-si RNA组CTHRC1基因m RNA和蛋白质的表达水平较对照组和空白组明显下调,而后两者CTHRC1基因m RNA和蛋白质的表达水平没有显著差异。4、CTHRC1-si RNA组细胞增殖能力被抑制,呈时间依赖性,较空白组和对照组明显下降;CTHRC1-si RNA组细胞迁移能力下降,较对照组和空白组明显降低。5、qRT-PCR和Western blot检测结果显示,CTHRC1-si RNA组E-cadherin基因m RNA和蛋白质的表达水平上调,而Ncadherin、Snail、Slug基因的m RNA和蛋白质的表达水平下调。在空白组和对照组E-cadherin、N-cadherin、Snail、Slug基因的m RNA和蛋白质表达水平没有明显差异。6、Western blot测定CTHRC1-si RNA组β-catenin的表达明显下调。结论:与正常皮质组织相比,胶质母细胞瘤组织中存在CTHRC1基因过表达的现象。CTHRC1基因的沉默可以抑制胶质母细胞瘤的迁移,这可能是通过抑制胶质母细胞瘤的上皮间质转化来实现的。CTHRC1基因在胶质母细胞瘤中具有潜在的致癌作用,对肿瘤的进展起着至关重要的作用。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R739.41

【参考文献】

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本文编号：2808916