MiR-93通过靶基因Mfn2调节血管平滑肌的增殖、迁移和内膜形成

发布时间：2020-09-27 17:08

　　 背景心血管疾病是威胁人类生命的最重要的疾病之一。许多研究证实,血管平滑肌细胞异常增生在心血管疾病中起着关键作用,如动脉粥样硬化和冠脉支架内再狭窄。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMCs)在损伤和其它刺激反应下,可减少收缩蛋白的表达,增加蛋白的表达,进而导致细胞增殖增加,这是血管成形术后血管再狭窄的主要发病机制。然而,血管成形术后血管再狭窄的分子机制还不完全清楚。因此,更好地了解这些血管再狭窄的调节机制可能会指导制定治疗心血管疾病的新策略。微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,与特定mRNA的3'非翻译区(3'UTR)结合,导致靶基因mRNA的降解。目前在人类基因组中已经发现了2,000多种miRNA。MiRNA在包括肿瘤、内分泌、神经系统及心血管等许多疾病中起作用,最近的研究发现,miRNA在控制VSMCs增殖和迁移过程中发挥关键作用,例如miR-132、miR-22、miR-379、miR-124等可以抑制VSMCs的增殖和迁移,而miR-214、miR-221/miR-222、miR-146等有促进VSMCs增殖和迁移的作用。MiR-93是第一个被发现的miR-17 microRNA簇,与脊椎动物谱系的早期进化密切相关。以前的研究表明miR-93参与了多种疾病,包括癌症、心肌缺血再灌注和脊髓神经元疾病。然而,miR-93是否参与VSMCs增殖还不完全清楚。线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)是存在于线粒体的一种GTP酶,对线粒体的融合和功能调节有重要的作用,有研究发现其在细胞内可以调控增殖和凋亡,最近的研究证实Mfn-2可以抑制VSMCs的增殖,因此,本研究拟在建立大鼠颈动脉球囊损伤后血管狭窄模型的基础上,探讨miR-93是否通过抑制Mfn-2表达而调节血管平滑肌的增殖和迁移。目的通过建立大鼠的颈动脉球囊损伤的动物模型和细胞的血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激的细胞模型,探讨miR-93在血管平滑肌中的作用和机制,为治疗和预防血管形成术后再狭窄提供新的作用靶点和理论基础。方法1实时逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测mi R-93在大鼠颈动脉损伤模型血管中的表达,qRT-PCR和免疫荧光检测miR-93在PDGF-BB刺激的VSMCs中的表达。2分别敲低动物和细胞miR-93的表达,颈动脉病理切片检测大鼠颈动脉狭窄程度,细胞四甲基偶氮唑蓝发(MTT)检测、EDU细胞增殖成像实验检测细胞增殖程度,细胞划痕实验和细胞微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell实验)检测细胞迁移程度。3 qRT-PCR检测大鼠颈动脉和VSMCs的Cyclin D1、MMP 2和Mfn-2的mRNA水平的表达。Western blot法检测大鼠颈动脉和VSMCs的Cyclin D1、MMP和Mfn2的蛋白水平的表达,Raf和ERK1/2的磷酸化水平。组织和细胞免疫荧光检测Mfn-2在组织和细胞的表达。4双荧光素酶报告基因鉴定mi R-93和Mfn2的3’UTR的结合。结果动物实验中,颈动脉损伤后大鼠血管平滑肌细胞MiR-93表达上调。细胞实验中,在用PDGF-BB处理后,在离体培养的VSMCs中观察到类似的结果。miR-93的抑制抑制颈动脉损伤后的新内膜形成。此外,我们的研究结果表明,miR-93抑制剂能够抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖和迁移,同时降低MMP2,Cyclin D1的表达。从机制分析,我们发现Mfn2是miR-93的直接靶基因。此外,检测Raf和ERK1/2的磷酸化程度发现,miR-93介导的VSMCs增殖和迁移归因于Raf-ERK1/2途径。结论在本研究中,我们将miR-93鉴定为VSMC增殖,分化和动脉损伤诱导的新生内膜增生的新型调节剂。我们报道miR-93通过靶向Mitofusin-2(Mfn2)促进VSMCs增殖和迁移,这可能是血管形成术后再狭窄的一个新的治疗靶点。
【学位单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R54
【部分图文】：

PsiCHECK-2载体质粒图谱

miR-93在颈动脉球囊损伤后第1天、7天、14天和第21天的表达量（*P<0.05,n=6）;B:miR-93在不同剂量PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞后的表达量（*P<0.05,n=4）;C:miR-93在PDGF-BB刺激血管平滑肌不同时间后的表达量（*P<0.05,n=4）;D:miR-93在血管平滑肌细胞中原位杂交后的免疫荧光

图2分别用antagomir-93和antagomir-93control转染大鼠后，观察大鼠颈动脉损伤14天后的情况

【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 李萍;;血管内皮细胞病理生理作用的研究进展[J];微循环学杂志;2014年04期

2 贾东煜;王贵学;;血管支架内再狭窄相关因素与机制的研究进展[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年35期

3 白融;冠状动脉支架内再狭窄发病机制的研究进展[J];心血管病学进展;2001年06期

本文编号：2828143