siRNA沉默FGFR3基因表达对肺癌SPC-A-1BM细胞致裸鼠骨转移的影响的研究

发布时间：2020-10-26 10:09

　　 目的:探究成纤维细胞生长因子受体3(Fibroblast Growth Factor Receptor-3,FGFR3)基因的沉默对高骨转移性人肺腺癌SPC-A-1BM细胞的影响及其对裸鼠骨转移的影响。方法:本实验共分为3个组:其中1组设置为实验组(FGFR3特异性siRNA干扰组),2组设置为阴性对照组(FGFR3非特异性阴性对照siRNA干扰组),3组设置为空白对照组(无siRNA干扰组)。通过核酸转染试剂脂质体Lipofectamine~(TM)2000(Lipo2000)介导siRNA转染高骨转移性人肺腺癌细胞株(SPC-A-1BM细胞株);实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于检测转染后FGFR3基因的m RNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western-Blot)用于检测转染前后FGFR3基因的蛋白表达水平;通过裸鼠尾静脉注射法进行建模,对各组裸鼠分别注射转染后的肺癌SPC-A-1BM细胞;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色法)用于制作裸鼠部分组织病理切片染色,明确各组裸鼠的肺癌SPC-A-1BM细胞骨转移的病理诊断,并进行区分对比各组骨转移的情况。结果:利用Lipo2000作为载体进行转染的各组siRNA对肺腺癌SPC-A-1BM细胞的转染效率可达约70%以上;Real-time PCR实验显示,实验组1组的FGFR3基因的表达被明显抑制,抑制率约为71%,和阴性对照组2组与空白对照组3组的FGFR3基因的表达量相对比,可见到明显的下调,利用单因素方差分析,差异有统计学意义(P0.01);Western-Blot实验显示,对于FGFR3蛋白,实验组1组相对比阴性对照组2组和空白对照组3组的蛋白表达量明显减少,各组条带灰度值之间差异有统计学意义(P0.01);各组裸鼠通过尾静脉注射法建模后,通过阴性对照组2组和空白对照组3组可以看出,约有50%-60%的裸鼠可见到不同程度的骨转移;经组织解剖取病理、制作蜡块、切片并进行HE染色实验显示,实验组1组相比较阴性对照组2组与空白对照组3组的裸鼠,发生肺癌骨转移的裸鼠数量及裸鼠骨转移的部位均明显减少,差异有统计学意义(P0.01)。结论:利用Lipo2000作为载体介导的siRNA技术转染SPC-A-1BM细胞沉默FGFR3基因可明显抑制肺癌细胞的侵袭能力,并能减少骨转移的发生及发展;本实验为针对FGFR3基因沉默的骨转移瘤治疗方法提供了理论依据,为肺癌骨转移的治疗提供了新的治疗靶点。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R734.2
【部分图文】：

条带颜色越深，亮度越高，说明含有的目的蛋白量越多。相反条带越浅，则含有的目的蛋白越少。如图所示，图1中从左至右依次为1、2、3组，Anti-FGFR3条带中1组的条带亮度较2、3组条带亮度低，2组阴性对照组与3组空白对照组的条带亮度相近，用Image J软件进行灰度分析，结果显示，1组的条带灰度值与2组、3组相对比，差异具有统计学意义，P＜0.01；2组、3组条带灰度值之间无统计学差异，P＞0.05。由图2柱状图中各组灰度值的比较能更清晰地对比出实验组

较2、3组条带亮度低，2组阴性对照组与3组空白对照组的条带亮度相近，用Image J软件进行灰度分析，结果显示，1组的条带灰度值与2组、3组相对比，差异具有统计学意义，P＜0.01；2组、3组条带灰度值之间无统计学差异，P＞0.05。由图2柱状图中各组灰度值的比较能更清晰地对比出实验组与对照组之间具有明显差异。

SPF环境下饲养的裸鼠
【参考文献】

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本文编号：2856857