库尔勒香梨成熟果实石细胞含量与POD4基因表达量的相关性分析

发布时间：2020-10-30 14:17

　　 【目的】研究成熟期库尔勒香梨粗皮果和正常果的石细胞含量与POD4基因即时表达量的相关性,为改良香梨果实品质提供分子依据。【方法】以成熟期库尔勒香梨粗皮果和正常果为试材,测定香梨果实的硬度和石细胞含量。提取香梨果肉总RNA,用qRT-PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction)方法测定POD4(peroxidase4)基因的即时表达量,分析硬度和石细胞含量与POD4基因表达的相关性。【结果】库尔勒香梨石细胞含量在0.4~0.52 g;硬度在245.22~314.71 kg/cm~2;POD4基因在成熟果实中的即时表达量在106.89~743.29。【结论】粗皮果石细胞含量是正常果的1.3倍,硬度是正常果的1.28倍,POD4基因的即时表达量是正常果的6.59倍。石细胞含量与POD4基因表达量成显著正相关(r=0.823),与果实硬度存在正相关(r=0.783),POD4基因表达量与果实硬度存在正相关(r=0.770)。POD4基因表达差异与形成两种表型库尔勒香梨果实成正相关。
【部分图文】：

确定三者之间的相关性，为今后阐述库尔勒香梨两种差异表型的发生机理提供候选基因。1材料与方法1．1材料1．1．1库尔勒香梨供试材料取自新疆农科院轮台果树资源圃农户香梨园，树龄20年。2015年9月，样品采摘果树冠外围果实100个，果实发育期150d。样品采摘后分类:粗皮果标准:选取果皮粗糙，目测果面明显凸凹不平，果点粗大或萼端绿色达到果实1/3;正常果选取果面较为光滑，目测无凸凹，果点小，脱萼或萼端微凸的果实。果实采摘后按上述标准分组测量切块，迅速放于液氮中冷冻处理，再放至－80℃冰箱长期保存。图1，图21．1．2试剂荧光定量引物POD4F和POD4Ｒ由上海生物工程技术服务有限公司合成。ＲNAprepPurePlantKit购自天耿公司，PrimeScriptＲＲTreagentKit购自Takara公司，SyBＲPremi×ExTaqTM购自TOYOBO、CFX96TMＲeal－TimeSystem实时荧光定量PCＲ仪(美国Bio－Ｒad)，DNATaq酶购自广东东盛生物科技有限公司。图1粗皮果Fig．1Ｒoughskinpear图2正常果Fig．2Normalskinpear1．2方法1．2．1粗皮果和正常果硬度和石细胞含量测定硬度:取10个果实，去皮，用BY－B型硬度计测定。石细胞含量:参照聂敬全［15］的方法进行。称取9个果实中部离果皮2.0mm至果心处的混合果肉35.0g，－20℃冷冻24h，在20000r/min下匀浆3min，匀浆加入水静置，倒出上层悬浮物，重复3次，所得石细胞烘干后称质量，重复3次。石细胞含量=测定的石细胞干质量/35×100。1．2．2POD4基因即时表达检测总ＲNA的提取:参考ＲNAprepPurePlantKit进行操作，取质量较好的总ＲNA进行反转录。cDNA的合成:参照PrimeScriptＲＲTreagentKit说明书，以100ng总ＲNA模板为起始材料，进行cDNA第一条链的合成。反应体系包括100ng总ＲNA，

正常果Fig．2Normalskinpear

胞含量和POD4基因表达量的相关性实时荧光定量PCＲ扩增数据采用2－△△ct方法分析。△Ct(目标基因)=Ct(目标基因)－Ct(同一样本actin)，△△Ct(目标基因)=处理组△Ct(目标基因)－对照组△Ct(目标基因)，相对倍数=2－△△ct(目标基因)。果实硬度和石细胞含量与POD4基因相对表达量做相关性分析。1．3数据统计采用Excel2007及SPSS17统计软件进行数据分析。2结果与分析2．1粗皮果和正常果硬度和石细胞含量研究表明，粗皮果果实硬度314.71km/cm2，正常果是245.22km/cm2，粗皮果是正常果的1.28倍。图3粗皮果石细胞含量的平均值比正常果高30%，粗皮果每百克果肉中含石细胞0.52g，在正常果中每百克果肉中含石细胞0.4g。图4图3库尔勒香梨果实硬度Fig．3FruitfirmnessofKorlafragrantpear图4库尔勒香梨果实石细胞含量Fig．4ThecontentofstonecellofKorlafragrantpear2．2ＲNA提取质量检测提取的果实ＲNA样本，经琼脂糖凝胶电泳检测表明，获得的总ＲNA均含有28S和18S两条带，且条带清晰，无蛋白质和DNA的污染，说明ＲNA样品完整、无降解;ＲNA样品A260/A280的值在1.95～2.00，说明样品具有较高的纯度，可满足下一步荧光定量的要求。图52．3POD4基因表达量利用qＲT－PCＲ技术对成熟果实进行基因表达量检测表明，POD4基因在成熟期香梨粗皮果果肉中表达量为743.29，正常果表达量106.89，POD4在粗皮果中表达量是正常果的6.59倍。图62．4石细胞增量和差异基因相对表达量的相关性研究表明，石细胞含量与POD4基因表达量存在显著正相关性，其相关系数为0.823，石细胞62
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李保国,梅龙珠,李叶春;库尔勒香梨高产优质栽培技术讲座 第二讲:库尔勒香梨的土、肥、水管理[J];新疆农垦科技;2001年02期

2 王杰君,张宜弟,任旭琴;库尔勒香梨新品种(系)简介[J];西北园艺;2001年01期

3 徐庆岫,覃伟铭,李春江,翟林涛,魁丹;库尔勒香梨产生粗皮果的原因分析[J];落叶果树;2002年01期

4 安农;库尔勒香梨[J];农村百事通;2004年02期

5 匡玉疆,于强;今年库尔勒香梨坐果情况调查与启示[J];西北园艺(果树);2005年05期

6 高启明,李疆,李阳;库尔勒香梨研究进展[J];经济林研究;2005年01期

7 李彦军;;库尔勒香梨大苗定植措施[J];新疆农垦科技;2006年01期

8 康梅;杨建波;许鹏;艾合买提·阿不都;吾买尔·吾斯曼;;库尔勒香梨采前管理技术[J];河北农业科技;2007年08期

9 林敏娟;王振磊;;不同地区库尔勒香梨内在品质的差异[J];山西果树;2007年05期

10 林敏娟;王振磊;;库尔勒香梨和新梨七号光合特性的研究[J];华北农学报;2007年S2期

相关博士学位论文 前7条

1 许娟;库尔勒香梨果实生长发育期及贮藏期生理生化特性研究[D];新疆农业大学;2015年

2 赵晓梅;库尔勒香梨采后萼端黑斑病的发生机理与控制研究[D];新疆农业大学;2015年

3 木合塔尔·扎热;库尔勒香梨树光能利用效率及宿萼果和粗皮果形成因子的研究[D];新疆农业大学;2012年

4 马本学;基于图像处理和光谱分析技术的水果品质快速无损检测方法研究[D];浙江大学;2009年

5 牛建新;库尔勒香梨和葡萄病毒分子检测技术研究[D];沈阳农业大学;2004年

6 马兵钢;新疆库尔勒香梨主要病毒的分子检测研究[D];华南热带农业大学;2004年

7 陈国刚;库尔勒香梨采后贮藏中果皮锈斑产生机制的研究[D];江南大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 成磊;绿色优质库尔勒香梨生产关键技术的试验研究与示范[D];西北农林科技大学;2004年

2 于辉莹;新疆库尔勒香梨品牌整合问题研究[D];华中师范大学;2015年

3 杨辽;基于多光谱数据的库尔勒香梨种植面积提取研究[D];新疆大学;2015年

4 刘晓婷;库尔勒香梨叶片再生与多倍体诱导研究[D];西北农林科技大学;2015年

5 乌英;库尔勒香梨化学成分及粗多糖生物活性初步研究[D];新疆医科大学;2015年

6 李芳芳;套袋对‘库尔勒香梨’果实香气物质的影响及其生理机制[D];南京农业大学;2014年

7 李青松;梨树蜂类授粉技术及钙钾对库尔勒香梨果实品质的影响[D];南京农业大学;2013年

8 南鑫;库尔勒香梨果实不同发育期光合作用特性及不同水分条件下果实品质研究[D];新疆农业大学;2014年

9 丁家鸣;花期气温变化对库尔勒香梨脱萼果和宿萼果形成的影响[D];新疆农业大学;2015年

10 赵越;库尔勒香梨植株体内铁素的时空分布及转运研究[D];新疆农业大学;2015年

本文编号：2862595