沉默TGIF基因对非小细胞肺癌A549细胞致瘤性的抑制作用

发布时间：2020-12-10 01:25

　　目的通过构建TGIF（TG-interacting factor,TGIF）稳定低表达的非小细胞肺癌细胞株（A549）,观察沉默TGIF对A549细胞周期分布及Wnt/β-Catenin信号通路的影响,探讨TGIF调控细胞周期的分子机制及对非小细胞肺癌细胞致瘤性的影响,为肺癌的治疗提供新的作用靶点。方法1.采用靶向TGIF的慢病毒颗粒和无效干扰对照慢病毒颗粒分别感染A549细胞,构建TGIF稳定低表达的细胞株（A549-shTGIF）和无效干扰对照细胞株（A549-shcon）,通过蛋白免疫印迹（Western blots）检测TGIF蛋白表达水平,鉴定TGIF稳定低表达的A549细胞株是否构建成功。2.利用CASY细胞计数分析仪分析接种细胞24小时、48小时、72小时、96小时后,A549-shTGIF和A549-shcon细胞增殖的差异。3.通过体外软琼脂克隆形成实验和体内裸鼠致瘤实验,分析TGIF稳定低表达细胞与无效干扰对照细胞致瘤性的差异。4.利用流式细胞仪分析TGIF稳定低表达组与无效干扰对照组细胞周期分布的差异。5.运用Western blots分析沉默TGIF对A549细... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

技术路线图

tern blots 检测 shRNA 对靶基因的沉默效率测靶向 TGIF 的慢病毒颗粒和无效对照慢病毒颗粒感染的基因沉默效率，我们用 Western blots 分别检测两组慢病毒胞中 TGIF 蛋白的表达水平。如图 3.1 所示，我们用β-Ac白上样量的评估，在β-Actin 蛋白表达量一致的情况下，IF 蛋白表达水平要远低于 A549-shcon 细胞。这说明 TGIF肺癌细胞 A549 细胞株构建成功。

图 3.2 沉默 TGIF 基因对 A549 细胞增殖能力的影响9-shcon 细胞数相比，同一时点的 A549-shTGIF 细胞数显著降TGIF 基因对 A549 细胞体外克隆形成能力的影隆形成实验结果显示，与 A549-shcon 细胞(58.4±4.049-shTGIF 细胞的克隆形成数量(37.3±2.6)明显降低(图(P<0.05)。结果提示，沉默 TGIF 基因可以降低 A54克隆的能力。

【参考文献】：
期刊论文
[1]TGIF,MMP9和蛋VEGF白在胃癌中的表达及临床病理联系[J]. 胡忠良,文继舫,沈明,刘英.  中南大学学报(医学版). 2006(01)
[2]TGIF对胃癌细胞生长和转移的影响[J]. 胡忠良,文继舫,肖德胜,郑晖,傅春燕.  生物化学与生物物理进展. 2005(09)
[3]Effects of transforming growth interacting factor on biological behaviors of gastric carcinoma cells[J]. Zhong-Liang Hu, Ji-Fang Wen, De-Sheng Xiao, Hui Zhen, Chun-Yan Fu, Department of Pathology, Basic Medical Institute, Central South University, Changsha 410078, Hunan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(01)



本文编号：2907826