利用CRISPR/Cas9技术构建Dppa5a基因敲除小鼠模型并分析表型
发布时间：2020-12-11 11:19
发育多潜能性维持因子5A（Dppa5a）是多能性细胞的标记基因。它在早期胚胎、生殖细胞系和胚胎干细胞（ES）中特异性表达,可能介导RNA转录、调控卵子发生和胚胎发育。CRISPR/Cas9是一项新兴的基因编辑技术,可以对基因进行高效的切割。本实验使用CRISPR/Cas9技术,通过显微注射的方式构建Dppa5a基因敲除(Dppa5a-/-)小鼠模型,分析Dppa5a-/-小鼠表型,从而研究该基因在小鼠生长发育中的作用。1.野生型（WT）小鼠卵母细胞及早期胚胎中Dppa5a的表达分析通过定量PCR技术分析Dppa5a基因在卵母细胞和早期胚胎中的表达量,结果发现:在GV期卵母细胞中,SN构型卵母细胞Dppa5a基因的表达明显低于NSN中的表达,且差异极显著（p=0.0075）。在早期胚胎中,MII期积累的大量RNA在受精后开始急剧下降,至2细胞阶段降到最低,仅为原来的9.0%;之后又慢慢积累,在桑椹胚时表达量达到顶峰,是MII时期的3.83倍。2.构建Dppa5a-/-小鼠模型在Dppa5a基因的第二个外显子功能域上设计两条...
【文章来源】：阜阳师范大学安徽省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
使用双链断裂的基因组编辑[4]
CRISPR/Cas 技术之所以被发现是因为对细菌本身防御系统的研究[14][15][16]。在（古）细菌基因组中存在着一种被一定长度的间隔序列分开的重复序列，间隔序列的长度根据细菌的种类和 CRISPR 位点不同会有所变化。这些间隔序列和噬菌体或质粒序列相似性很高[17][18]，这说明这些间隔序列不属于细菌本身。间隔序列在被转录成为 crRNA后，能够和细菌自身的 Cas 核酸酶形成复合体并起到指引作用[19]。1.1 CRISPR/Cas 系统的发展及应用CRISPR/Cas 的故事开始于 1987 年，2013 年首次将此系统用于基因组编辑，在此之后，这个领域发展迅速。被应用于基因组编辑，CRISPR/Cas9 技术可以通过 SgRNA序列将 Cas9 蛋白指引到目的基因的特定位点上，Cas9 进行切割使 DNA 断裂。最近的几项研究，CRISPR/Cas9 技术被应到疾病的治疗中，这对临床基因治疗的发展有了巨大的推动作用（如图 1.2）。
阜阳师范学院硕士学位论文识别并将其切成小片段（Spacer），将其安装到基因组内的 CRISPR 基因隔区在直接重复序列之间隔离，使 CRISPR 系统能够介导自我和非自我段是 crRNA 成熟，CRISPR 序列转录为长的 RNA，然后被剪接成 crRN对外源遗传物质的识别与切割，tracrRNA、crRNA 和 Cas9 形成复合体NA 序列并结合上去，引导复合体实现切割[19][50]（如图 1.4 a）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]胰高血糖素样肽-2功能的研究新进展[J]. 马丽娜,毕会民,高凌. 中国医药导报. 2017(27)
[2]胚胎干细胞中DPPA2和DPPA4蛋白相互作用的研究[J]. 杨洁,雷霆钧,田平平,吴传芳,欧阳劲,秦岭. 四川大学学报(自然科学版). 2013(02)
[3]DPPA2基因的研究进展[J]. 赵谦,杜娟. 现代生物医学进展. 2011(18)
[4]猪多潜能性维持因子5 cDNA全序列的克隆与分析[J]. 李勇,王立刚,王立贤,乔丽娟,张龙超,颜华. 农业生物技术学报. 2010(02)
硕士论文
[1]猪Dppa5, FP和MAL2基因遗传多态性与繁殖性状的关联分析[D]. 李稳.中国农业科学院 2011
本文编号：2910438
【文章来源】：阜阳师范大学安徽省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
使用双链断裂的基因组编辑[4]
CRISPR/Cas 技术之所以被发现是因为对细菌本身防御系统的研究[14][15][16]。在（古）细菌基因组中存在着一种被一定长度的间隔序列分开的重复序列，间隔序列的长度根据细菌的种类和 CRISPR 位点不同会有所变化。这些间隔序列和噬菌体或质粒序列相似性很高[17][18]，这说明这些间隔序列不属于细菌本身。间隔序列在被转录成为 crRNA后，能够和细菌自身的 Cas 核酸酶形成复合体并起到指引作用[19]。1.1 CRISPR/Cas 系统的发展及应用CRISPR/Cas 的故事开始于 1987 年，2013 年首次将此系统用于基因组编辑，在此之后，这个领域发展迅速。被应用于基因组编辑，CRISPR/Cas9 技术可以通过 SgRNA序列将 Cas9 蛋白指引到目的基因的特定位点上，Cas9 进行切割使 DNA 断裂。最近的几项研究，CRISPR/Cas9 技术被应到疾病的治疗中，这对临床基因治疗的发展有了巨大的推动作用（如图 1.2）。
阜阳师范学院硕士学位论文识别并将其切成小片段（Spacer），将其安装到基因组内的 CRISPR 基因隔区在直接重复序列之间隔离，使 CRISPR 系统能够介导自我和非自我段是 crRNA 成熟，CRISPR 序列转录为长的 RNA，然后被剪接成 crRN对外源遗传物质的识别与切割，tracrRNA、crRNA 和 Cas9 形成复合体NA 序列并结合上去，引导复合体实现切割[19][50]（如图 1.4 a）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]胰高血糖素样肽-2功能的研究新进展[J]. 马丽娜,毕会民,高凌. 中国医药导报. 2017(27)
[2]胚胎干细胞中DPPA2和DPPA4蛋白相互作用的研究[J]. 杨洁,雷霆钧,田平平,吴传芳,欧阳劲,秦岭. 四川大学学报(自然科学版). 2013(02)
[3]DPPA2基因的研究进展[J]. 赵谦,杜娟. 现代生物医学进展. 2011(18)
[4]猪多潜能性维持因子5 cDNA全序列的克隆与分析[J]. 李勇,王立刚,王立贤,乔丽娟,张龙超,颜华. 农业生物技术学报. 2010(02)
硕士论文
[1]猪Dppa5, FP和MAL2基因遗传多态性与繁殖性状的关联分析[D]. 李稳.中国农业科学院 2011
本文编号：2910438
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2910438.html
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