沉默ACTN1基因表达能抑制肾癌细胞的生长且诱导细胞凋亡

发布时间：2017-04-08 23:07

  本文关键词：沉默ACTN1基因表达能抑制肾癌细胞的生长且诱导细胞凋亡，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨ACTN1基因(α-actin 1)表达与肾细胞癌发病的相关性。在其它类型肿瘤(结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等)中已经证实ACTN基因在癌组织中是高表达的,但是ACTN1基因与肾癌的关系尚不清楚。若能证明ACTN1基因在肾细胞癌中同样高表达,在体外功能实验中观察沉默ACTN1基因的表达之后,否能影响肾癌细胞的生长及凋亡。方法收集38例肾癌患者的肾癌组织及相对应的癌旁组织通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫印迹(western-blotting,WB)的方法来观察ACTN1基因在癌组织中的表达情况。设计针对ACTN1基因的siRNA来沉默该基因在肾癌细胞系786-O和A704中的表达,通过与空白对照组和阴性对照组之间的对比观察ACTN1基因对肾癌细胞系的生长、增殖、侵袭、迁徙、凋亡、以及细胞周期等方面的影响。通过测序的方法探索影响肾癌组织中ACTN1基因高表达的影响因素。结果1.在38例肾癌患者的肾癌组织中ACTN1的表达比相对应的癌旁组织要高,差异具有统计学意义(P0.01)。2.siRNA能有效地、特异地下调肾癌细胞系786-O和A704中ACTN1基因mRNA(P0.01)和蛋白的表达。3.ACTN1基因表达的下调会抑制肾癌细胞系786-O和A704增殖、侵袭、迁移。4.ACTN1基因表达的下调会诱导肾癌细胞系786-O和A704的凋亡。5.ACTN1基因表达的下调会影响肾癌细胞系786-O和A704细胞周期,使细胞周期停滞在G0/G1期。6.肾癌中ACTN1基因的高表达可能与基因拷贝数变异(copy number alterations,CNAs)有关。结论1.ACTN1基因在肾细胞癌中的高表达提示该基因在肾细胞癌发生发展的过程中起到重要的作用,是肾癌形成的相关癌基因之一;2.下调ACTN1基因的表达可抑制肾癌细胞系的增殖、侵袭、迁移,说明ACTN1基因可能在肾细胞癌中对肿瘤的生长、向周围组织侵犯、远处转移的方面起着至关重要的作用。3.下调ACTN1基因的表达会有到肾癌细胞系发生凋亡,且起到阻滞细胞周期的作用。
【关键词】：肾细胞癌 ACTN1基因 小干扰RNA
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-7
• 一 前言7-10
• 1.1 肾细胞癌7
• 1.2 肾细胞癌基因学及靶向治疗的研究现状7-8
• 1.3 ACTN1与肿瘤的关系8-9
• 1.4 本研究设计思路9-10
• 二 材料与方法10-19
• 2.1 肾癌组织样本的收集10
• 2.2 主要试剂和仪器10-12
• 2.3 细胞培养12
• 2.4 细胞转染12
• 2.5 实时定量PCR12-14
• 2.5.1 RNA组织的提取13
• 2.5.2 去基因组13-14
• 2.5.3 纯度检测14
• 2.5.4 逆转录14
• 2.5.5 PCR定量14
• 2.6 Western blot检测14-16
• 2.6.1 SDS-PAGE电泳分离胶的配制14-15
• 2.6.2 SDS-PAGE电泳浓缩胶的配制15
• 2.6.3 样品的处理15
• 2.6.4 免疫印迹（Western Blotting）15-16
• 2.7 cck-8 试验测试细胞增殖能力16
• 2.8 transwell法检测细胞迁移能力16
• 2.9 transwell法检测细胞侵袭能力16-17
• 2.10 细胞划痕试验17
• 2.11 细胞凋亡检测17-18
• 2.12 细胞周期分析18
• 2.13 统计学方法18
• 2.14 测序方法探索ACTN1基因在RCC中高表达的影响因素18-19
• 三 结果19-26
• 3.1 ACTN1 mRNA水平在RCC患者的肿瘤组织中高于癌旁正常组织19-20
• 3.2 ACTN1 siRNA有效下调肾癌细胞系中ACTN1 mRNA和蛋白的表达20-21
• 3.3 ACTN1 siRNA抑制肾癌细胞的增殖21-22
• 3.4 Transwell法证实ACTN1 siRNA抑制肾癌细胞的侵袭和迁移22-23
• 3.5 细胞划痕实验证实ACTN1 siRNA使肾癌细胞的侵袭力下降23-24
• 3.6 ACTN1 siRNA诱导肾癌细胞系凋亡24
• 3.7 下调ACTN1基因阻断肾癌细胞系细胞周期进程24-25
• 3.8 RCC肿瘤组织ACTN1过表达可能受基因拷贝数变异影响25-26
• 四 讨论26-27
• 五 结论27-28
• 参考文献28-31
• 缩略词表31-32
• 综述：单细胞转录组测序在肿瘤异质性研究及临床中的应用32-43
• 参考文献39-43
• 在学期间研究成果43-44
• 致谢44

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 席志军,俞莉章,郭应禄,张凯,姜学军,张志文;白细胞介素-6与肾癌细胞生长关系的实验研究[J];中华医学杂志;2000年04期

2 叶雄俊,张志文,林桂亭,金桂花,陈培拉,韩亮,黄世思,艾军魁,辛殿祺,郭应禄,常智杰;激活转录因子5在肾癌细胞系中的表达及意义[J];中华泌尿外科杂志;2003年04期

3 宋东奎,潘周辉,杨太森;人反义血管内皮生长因子基因表达对肾癌细胞的影响[J];中华泌尿外科杂志;2003年08期

4 杨风光;叶烈夫;林乐;李涛;何延瑜;张志文;郭应禄;;过氧化物酶体增殖激活物受体γ配体对肾癌细胞血管生成的影响[J];福建医药杂志;2009年06期

5 龚明军;;一种肾癌细胞基因复制表达顺序研究的新方法[J];中国医学创新;2012年26期

6 潘李珍，，张漪;人体肾癌细胞培养1例报告[J];首都医科大学学报;1996年01期

7 吴伟成,岩村正嗣,小柴健;甲状旁腺素相关蛋白在肾癌细胞中的表达及调节作用[J];中华泌尿外科杂志;1997年07期

8 许宁,石爱平,赵忠文,王乃义;肾癌细胞的凋亡与调控因子的表达[J];中华外科杂志;1998年07期

9 王威,刘梁,董雪,徐香兰,沈彬,寇慧珠,刘涛,吴明明,虞颂庭;钙粘蛋白E在肾癌细胞中的表达[J];中国肿瘤临床;2000年04期

10 施浩强;于德新;;干扰素在肾癌细胞中的生物学效应[J];国际泌尿系统杂志;2006年03期

中国重要会议论文全文数据库 前9条

1 王威;刘;董雪;徐香兰;沈彬;寇慧珠;刘涛;吴明明;虞颂庭;;钙粘蛋白E在肾癌细胞中的表达[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

2 王志华;胡志全;叶章群;庄乾元;杨为民;陈志强;刘继红;;树突状细胞的体外扩增及培养上清液对肾癌细胞的作用[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

3 申文江;孙凌飞;孙新臣;朱丽红;邵彦;黄渊;;安替可对肾癌细胞的放射敏感性影响[A];第八届全国中西医结合肿瘤学术会议论文集[C];2000年

4 章小平;钱晓辉;李炎生;曾四平;肖亚军;赵军;曾甫清;肖传国;;VHL表达逆转肾癌细胞的TRAIL耐受性[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

5 杨清滔;谷江;张永春;杨永安;王楠;朱致晖;祝庆亮;;高表达HIF-1α对肾癌细胞增殖及细胞内STC-1、Ca2+水平影响的研究[A];2013年贵州省泌尿外科学术会议论文汇编[C];2013年

6 丁晓飞;沈茂;严巧娣;陈光;;pVHL调控NEK-8维持肾癌细胞原纤毛结构稳定的机制研究[A];2013医学前沿论坛暨第十三届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2013年

7 李金锋;王国民;戎瑞明;朱同玉;;SiRNA对肾癌细胞系COX-2基因的抑制作用及其质粒载体的构建[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

8 朱致晖;谷江;肖海涛;张永春;罗明俊;杨永安;王楠;杨清滔;;人类斯钙素蛋白1对肾癌细胞中STC-1、HIF-1α及Ca2+影响的研究[A];2013年贵州省泌尿外科学术会议论文汇编[C];2013年

9 申文江;孙凌飞;孙新臣;朱丽红;邵彦;黄渊;;安替可对肾癌细胞FasR、FasL和Bel-2基因表达的影响及意义[A];第八届全国中西医结合肿瘤学术会议论文集[C];2000年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 记者 王丹;维生素C可让肾癌细胞因“饥饿”死亡[N];健康报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 冯陈陈;自噬联合mTOR通路或磷酸戊糖途径双重抑制对肾细胞癌治疗的研究[D];复旦大学;2014年

2 陈鹏亮;miR-199靶向调控ROCK1影响肾癌细胞增殖、侵袭及凋亡的机制研究[D];南方医科大学;2015年

3 王志峰;索拉非尼对肾癌细胞系786-0干性相关表达影响[D];南方医科大学;2015年

4 杜贤进;蓝舌病毒湖北株选择性诱导肾癌细胞死亡及其机制的研究[D];武汉大学;2010年

5 杨林;肾癌细胞来源exosomes的提取鉴定及对肾癌恶性演进的影响和机制研究[D];重庆医科大学;2013年

6 毕建斌;肾癌细胞中环氧合酶-2的表达及非甾体类抗炎药NS398对肾癌细胞生长抑制作用的研究[D];中国医科大学;2006年

7 张琦;紫杉醇或γ线放射介导的自噬现象对Folliculin基因缺陷肾癌细胞放化疗敏感性影响的研究[D];山东大学;2014年

8 罗延诚;MicroRNA-184在肾细胞癌中低表达的作用及其机制的研究[D];中南大学;2013年

9 陈宣余;miR-141抑制肾癌细胞增殖和转移的新机制[D];华中科技大学;2014年

10 李松超;MicroRNA-210对缺氧状态下肾癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制研究[D];中南大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 徐荣;肾癌细胞中内源性Wnt以自分泌的方式刺激Fzd7的胞吞作用[D];苏州大学;2015年

2 吴本鹤;白介素-2联合不同剂量索拉菲尼对肾癌细胞的体内外杀伤效应的初步研究[D];安徽医科大学;2015年

3 李丽;NFATs-ET1通路在肾癌细胞786O增殖和迁移中的作用及其机制[D];南昌大学医学院;2015年

4 韩庆杰;siRNA沉默DAD1基因表达对肾癌细胞A498增殖与侵袭能力的影响[D];南华大学;2015年

5 熊虎;沉默ACTN1基因表达能抑制肾癌细胞的生长且诱导细胞凋亡[D];兰州大学;2016年

6 张黎明;热休克肾癌细胞冻融瘤苗特异性杀伤效应的研究[D];中国医科大学;2009年

7 陈磊;体外侵袭实验分离高侵袭性和低侵袭性肾癌细胞[D];安徽医科大学;2008年

8 陈馨;α干扰素对肾癌细胞生长影响的体外研究[D];浙江大学;2008年

9 田伟华;高剂量维生素C杀死肾癌细胞相关机理研究[D];中国科学技术大学;2011年

10 张强;吲哚醌抑制肾癌细胞生长的蛋白质组学研究[D];青岛大学;2008年

  本文关键词：沉默ACTN1基因表达能抑制肾癌细胞的生长且诱导细胞凋亡，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：293894