5种碳青霉烯酶基因多重PCR技术的建立及临床应用
发布时间：2021-01-06 05:07
研究背景与目的:碳青霉烯类抗菌药物是一类抗菌谱广、抗菌作用强、不良反应发生率低的药物,但是随着这类药物的不当使用,使得耐药率随之上升,肠杆菌科细菌是目前对碳青霉烯类抗菌药物产生耐药的主要菌群。肠杆菌科细菌对碳青霉烯酶耐药机制主要分为三类:（1）膜通透性的改变;（2）药物作用靶点的改变;（3）产碳青霉烯酶。研究表明,产碳青霉烯酶是肠杆菌科细菌最主要的耐药机制。编码碳青霉烯酶的基因通常位于可移动的元件上,如质粒、整合子、插入序列等,易在细菌间横向传播,造成耐药菌的流行和爆发。碳青霉烯酶（Carbapenemase）可根据Ambler分类分为三类（A、B和D类）,A类酶包括KPC、GES、SME等,B类酶包括IMP、NDM、VIM等,D类包括OXA-23、OXA-48等。虽然种类繁多,但全球范围内主要流行5种碳青霉烯酶:KPC（Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase）、NDM（New Delhi Metallo-lactamase）、VIM（Verona Integron-encoded Metallo-lactamase）、IMP（Imipenem-resi...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２?ＭＴ－ＰＣＲ检测５种碳青霉烯酶基因的检测限分析??
?第四章基于线性指数ＰＣＲ的侧流层析技术检测ｂｌａＩＭＰ???Ａ１?Ａ２?Ｂ１?Ｂ２??图４－３固定用戊二醛交联ＢＳＡ和氨基标记探针的侧流层析试纸条检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产??物的结果??Ｆｉｇ．?４－３?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＬＡＴＥ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＬＦＡ?ｏｆ?ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ??ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ?ＢＳＡ?ａｎｄ?ａｍｉｎｏ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ??图注：Ａｌ、Ａ２：戊二醛交联ＢＳＡ和氨基标记的探针，固定在测流层析试纸条上检测??ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物，３０ｍｉｎ后观察没有条带，１２ｈ观察无条带；Ｂｌ、Ｂ２：?ＥＤＣ－ＮＨＳ交联ＢＳＡ和??氨基标记的探针，固定在测流层析试纸条上检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物，３０ｍｉｎ后观察没有条带。??１２ｈ后观察产生条带。??（３）?地高辛（Ｄｉｇ）标记探针和地高辛抗体反应后，固定在侧流层析试纸条??上检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物，半小时后观察结果。未在层析缓冲液中加０．０７％酪蛋??白封闭试纸条多余的抗Ｄｉｇ抗体，阳性对照和阴性对照产生较为明显的条带。??当在层析缓冲液中加入０．０７％酪蛋白封闭试纸条上多余的抗地高辛抗体时，阳??性对照产生明显条带，而阴性对照未产生条带。??５０??
?硕士学位论文???ｉ－?ｄ－??＜（Ｓｉ??图４－４固交联ａｎｔｉ－Ｄｉｇ抗体的Ｄｉｇ标记探针的侧流层析试纸条检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物的结??果??Ｆｉｇ．?４－４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＬＡＴＥ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｂｙ?ＬＦＡ?ｏｆ?Ｄｉｇ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ?ｗｉｔｈ?Ａｎｔｉ??Ｄｉｇ?ａｎｔｉｂｏｄｙ??图注：Ｃｌ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４：地高辛标记探针与抗地高辛抗体交联后，固定于试纸条３７°Ｃ??干燥３ｈ后，检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物的结果；Ｃｌ、Ｃ２：在Ｒｕｎｎｉｎｇ?Ｂｕｆｆｅｒ中未加入０．０７％酪??蛋白：Ｃ３、Ｃ４：在Ｒｕｎｎｉｎｇ?Ｂｕｆｆｅｒ中未加入０．０７％酪蛋白。Ｃｌ、Ｃ３，为阳性对照，Ｃ２、??Ｃ４为阴性对照。??第五节结果讨论??产碳青霉烯酶肠杆菌的出现，使得患者的死亡率升高。近年来产碳青霉烯??酶耐药菌更是呈现爆发的趋势。因此我们急需一种快速准确的检测ＣＰＥ方法，??以便为患者提供快速、及时，有针对性的治疗方案，限制ＣＰＥ快速传播。??侧流层析实验是一种简便而有效的分析工具，无需使用复杂设备的情况下即??可快速的检测目标分析物是否存在。但是普通的侧流层析试纸条检测限较低。??当前提高侧流层析试纸条检测限的方法主要分为两种：一种是扩大检测区域的??５１??
本文编号：2959985
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２?ＭＴ－ＰＣＲ检测５种碳青霉烯酶基因的检测限分析??
?第四章基于线性指数ＰＣＲ的侧流层析技术检测ｂｌａＩＭＰ???Ａ１?Ａ２?Ｂ１?Ｂ２??图４－３固定用戊二醛交联ＢＳＡ和氨基标记探针的侧流层析试纸条检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产??物的结果??Ｆｉｇ．?４－３?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＬＡＴＥ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＬＦＡ?ｏｆ?ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ??ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ?ＢＳＡ?ａｎｄ?ａｍｉｎｏ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ??图注：Ａｌ、Ａ２：戊二醛交联ＢＳＡ和氨基标记的探针，固定在测流层析试纸条上检测??ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物，３０ｍｉｎ后观察没有条带，１２ｈ观察无条带；Ｂｌ、Ｂ２：?ＥＤＣ－ＮＨＳ交联ＢＳＡ和??氨基标记的探针，固定在测流层析试纸条上检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物，３０ｍｉｎ后观察没有条带。??１２ｈ后观察产生条带。??（３）?地高辛（Ｄｉｇ）标记探针和地高辛抗体反应后，固定在侧流层析试纸条??上检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物，半小时后观察结果。未在层析缓冲液中加０．０７％酪蛋??白封闭试纸条多余的抗Ｄｉｇ抗体，阳性对照和阴性对照产生较为明显的条带。??当在层析缓冲液中加入０．０７％酪蛋白封闭试纸条上多余的抗地高辛抗体时，阳??性对照产生明显条带，而阴性对照未产生条带。??５０??
?硕士学位论文???ｉ－?ｄ－??＜（Ｓｉ??图４－４固交联ａｎｔｉ－Ｄｉｇ抗体的Ｄｉｇ标记探针的侧流层析试纸条检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物的结??果??Ｆｉｇ．?４－４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＬＡＴＥ－ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｂｙ?ＬＦＡ?ｏｆ?Ｄｉｇ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ?ｗｉｔｈ?Ａｎｔｉ??Ｄｉｇ?ａｎｔｉｂｏｄｙ??图注：Ｃｌ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４：地高辛标记探针与抗地高辛抗体交联后，固定于试纸条３７°Ｃ??干燥３ｈ后，检测ＬＡＴＥ－ＰＣＲ产物的结果；Ｃｌ、Ｃ２：在Ｒｕｎｎｉｎｇ?Ｂｕｆｆｅｒ中未加入０．０７％酪??蛋白：Ｃ３、Ｃ４：在Ｒｕｎｎｉｎｇ?Ｂｕｆｆｅｒ中未加入０．０７％酪蛋白。Ｃｌ、Ｃ３，为阳性对照，Ｃ２、??Ｃ４为阴性对照。??第五节结果讨论??产碳青霉烯酶肠杆菌的出现，使得患者的死亡率升高。近年来产碳青霉烯??酶耐药菌更是呈现爆发的趋势。因此我们急需一种快速准确的检测ＣＰＥ方法，??以便为患者提供快速、及时，有针对性的治疗方案，限制ＣＰＥ快速传播。??侧流层析实验是一种简便而有效的分析工具，无需使用复杂设备的情况下即??可快速的检测目标分析物是否存在。但是普通的侧流层析试纸条检测限较低。??当前提高侧流层析试纸条检测限的方法主要分为两种：一种是扩大检测区域的??５１??
本文编号：2959985
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2959985.html
最近更新
教材专著
