NPR-C基因A-55C位点多态性在高血压病理机制中作用的研究
发布时间:2021-01-08 22:52
[目的]原发性高血压是最常见的危害人体健康的心血管疾病,是在遗传易感的基础上,多种环境因素综合作用的结果。高血压病的病因病理机制复杂,其中钠肽家族及其受体起着举足轻重的作用。前人及我们前期的研究均发现高血压患者存在NPR-C基因A-55C位点多态性,并影响高血压病的发生,但其在病理机制中的作用并不清楚。NPR-C基因A-55C位点处于基因表达调控区,推测该位点多态性有可能影响NPR-C表达,进而影响其对配体ANP的清除,或影响NPR-C及其配体结合后的信号通路。为此,本研究试图通过对高血压病患者NPR-C基因A-55C位点多态性与外周血调节血压相关因素的分析,对上述假设给予求证。[研究方法]1.研究对象及样本采集根据高血压的诊断标准:参照《2010年高血压防治指南》,排除继发性高血压者。剔除研究对象的民族界定不清或基本特征指标信息不清者。从昆明市第一人民医院体检、门诊和住院患者中,筛选出100例云南汉族原发性高血压患者作为研究对象(父系、母系三代均为汉族,均居住云南境内),年龄在40-80之间,其中男48例,女52例。采集患者空腹静脉血进行患者NPR-C基因A-55C位点多态性、血脂血...
【文章来源】:昆明医科大学云南省
【文章页数】:73 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图2-1不同引物量PCR反应体系扩增产物电泳结果??__
1?2?3?4?5?M???600bp???400bp???lOObp??图2-2不同模板量PCR反应体系扩增产物电泳结果??注:M为DNAMarker,卜5分别为加入5|iL、4(aL、3pL、2(iL、l(iL模板量下扩增??产物电泳结果??2.?1.?3目的片段PCR扩增体系优化结果??经引物量和模板量优化,最终确定用以下PCR扩增体系对患者样本进行??目的片段扩增。??试剂?反应体系??DreamTaq?Green?PCR?Master??、?25?liL??Mix?(2X)??正向引物?0.?5pJL??反向引物?0.?5pL??DNA?模板?3?fiL??无核酸酶水?21?pL??PCR扩增总量?50?pL??2.?1.?4?PCR扩增反应条件中退火温度优化??分别用12个梯度的退火温度进行目的片段PCR扩增,其产物电泳结果见图??2-3。图中显示,退火温度为58°C的扩增产物电泳条带亮(7号电泳条带),且??非特异性条带少,故选择为最佳退火温度。??28??
1?2?3?4?5?6?7?8?9?10?11?12?M??|?t?600bp??^ ̄1,v,!,;??Ul?■???图2-3不同退火温度下目的片段扩增产物电泳结果??注:M为?DNAMarker,卜12?分别为?62.C,61.6-C,?61.3.C,?60.6X:,59.7X:,58.9.C,?58。0??57.?3°C,?56.4'C,?55.?7°C,?55.4°C,?55°C退火温度下目的片段扩增产物电泳结果??2.?1.5目的片段PCR扩增反应条件的优化结果,??经退火温度优化,最终确定用以下PCR扩增条件对患者样本进行目的片段??扩增。??I#??预变性?95°C?3?min??变性?96°C?50?s?->??退火?58V?50?s?_循环??30次??延伸?72?°C?60s??_??末端延伸?72°C?5?min??2.?2目的片段PCR扩增产物测序结果??将4份患者标本的目的基因PCR扩增产物送生工生物工程上海测序部进行??正、反向测序以验证NPR-C基因A-55C位点所在目的片段PCR扩增产物的特??异性,其测序结果的DNA碱基序列见表2-1,测序峰值图见图2-4。通过与??geneBank中的目的序列比对同源性为96%。??29??
本文编号:2965458
【文章来源】:昆明医科大学云南省
【文章页数】:73 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图2-1不同引物量PCR反应体系扩增产物电泳结果??__
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