NPR-C基因A-55C位点多态性在高血压病理机制中作用的研究

发布时间：2021-01-08 22:52

　　[目的]原发性高血压是最常见的危害人体健康的心血管疾病,是在遗传易感的基础上,多种环境因素综合作用的结果。高血压病的病因病理机制复杂,其中钠肽家族及其受体起着举足轻重的作用。前人及我们前期的研究均发现高血压患者存在NPR-C基因A-55C位点多态性,并影响高血压病的发生,但其在病理机制中的作用并不清楚。NPR-C基因A-55C位点处于基因表达调控区,推测该位点多态性有可能影响NPR-C表达,进而影响其对配体ANP的清除,或影响NPR-C及其配体结合后的信号通路。为此,本研究试图通过对高血压病患者NPR-C基因A-55C位点多态性与外周血调节血压相关因素的分析,对上述假设给予求证。[研究方法]1.研究对象及样本采集根据高血压的诊断标准:参照《2010年高血压防治指南》,排除继发性高血压者。剔除研究对象的民族界定不清或基本特征指标信息不清者。从昆明市第一人民医院体检、门诊和住院患者中,筛选出100例云南汉族原发性高血压患者作为研究对象（父系、母系三代均为汉族,均居住云南境内）,年龄在40-80之间,其中男48例,女52例。采集患者空腹静脉血进行患者NPR-C基因A-55C位点多态性、血脂血... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１不同引物量ＰＣＲ反应体系扩增产物电泳结果??＿＿

１?２?３?４?５?Ｍ???６００ｂｐ???４００ｂｐ???ｌＯＯｂｐ??图２－２不同模板量ＰＣＲ反应体系扩增产物电泳结果??注：Ｍ为ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜５分别为加入５｜ｉＬ、４（ａＬ、３ｐＬ、２（ｉＬ、ｌ（ｉＬ模板量下扩增??产物电泳结果??２．?１．?３目的片段ＰＣＲ扩增体系优化结果??经引物量和模板量优化，最终确定用以下ＰＣＲ扩增体系对患者样本进行??目的片段扩增。??试剂?反应体系??ＤｒｅａｍＴａｑ?Ｇｒｅｅｎ?ＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ??、?２５?ｌｉＬ??Ｍｉｘ?（２Ｘ）??正向引物?０．?５ｐＪＬ??反向引物?０．?５ｐＬ??ＤＮＡ?模板?３?ｆｉＬ??无核酸酶水?２１?ｐＬ??ＰＣＲ扩增总量?５０?ｐＬ??２．?１．?４?ＰＣＲ扩增反应条件中退火温度优化??分别用１２个梯度的退火温度进行目的片段ＰＣＲ扩增，其产物电泳结果见图??２－３。图中显示，退火温度为５８°Ｃ的扩增产物电泳条带亮（７号电泳条带），且??非特异性条带少，故选择为最佳退火温度。??２８??

１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?Ｍ??｜?ｔ?６００ｂｐ??＾￣１，ｖ，！，；??Ｕｌ?■???图２－３不同退火温度下目的片段扩增产物电泳结果??注：Ｍ为?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，卜１２?分别为?６２．Ｃ，６１．６－Ｃ，?６１．３．Ｃ，?６０．６Ｘ：，５９．７Ｘ：，５８．９．Ｃ，?５８。０??５７．?３°Ｃ，?５６．４＇Ｃ，?５５．?７°Ｃ，?５５．４°Ｃ，?５５°Ｃ退火温度下目的片段扩增产物电泳结果??２．?１．５目的片段ＰＣＲ扩增反应条件的优化结果，??经退火温度优化，最终确定用以下ＰＣＲ扩增条件对患者样本进行目的片段??扩增。??Ｉ＃??预变性?９５°Ｃ?３?ｍｉｎ??变性?９６°Ｃ?５０?ｓ?－＞??退火?５８Ｖ?５０?ｓ?＿循环??３０次??延伸?７２?°Ｃ?６０ｓ??＿??末端延伸?７２°Ｃ?５?ｍｉｎ??２．?２目的片段ＰＣＲ扩增产物测序结果??将４份患者标本的目的基因ＰＣＲ扩增产物送生工生物工程上海测序部进行??正、反向测序以验证ＮＰＲ－Ｃ基因Ａ－５５Ｃ位点所在目的片段ＰＣＲ扩增产物的特??异性，其测序结果的ＤＮＡ碱基序列见表２－１，测序峰值图见图２－４。通过与??ｇｅｎｅＢａｎｋ中的目的序列比对同源性为９６％。??２９??


本文编号：2965458