党参CpPMM基因的克隆与表达分析

发布时间：2021-01-11 20:56

　　GDP-甘露糖为党参多糖合成的重要前体物质,参与糖链的合成。磷酸甘露糖变位酶（phosphomannomutase,PMM）催化甘露糖-6-磷酸（Man-6-P）向甘露糖-1-磷酸（Man-1-P）转化,从而合成GDP-甘露糖。该研究依据党参Codonopsis pilosula转录组数据中PMM基因序列信息,设计特异性引物,克隆得到了党参PMM基因全长,命名为CpPMM。通过生物信息学、原核表达以及qRT-PCR技术分析CpPMM基因的表达与党参多糖合成之间的相关性。结果显示,CpPMM基因包含1个741 bp的开放阅读框（ORF）,编码246个氨基酸,与其他物种的PMM具有高度相似性,同菊科向日葵具有高度同源性,预测为亲水性非跨膜蛋白,无信号肽,预测其定位于细胞质中,含有多个磷酸化位点,结合保守结构域预测分析,该蛋白属于HAD（haloacid dehalogenase,卤素脱氢酶）超家族;原核表达研究显示,CpPMM融合蛋白大小约为29 kDa,同预测相对分子质量基本相似,目的蛋白为包涵体,部分可溶;qRT-PCR结果表明,CpPMM基因具有时空表达特异性,结果期表达量显著高于盛... 

【文章来源】：中国中药杂志. 2020,45(18)北大核心

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 仪器与试剂
    1.2 试验样品
2 方法
    2.1 CpPMM基因全长cDNA的扩增
    2.2 CpPMM基因的生物信息学分析
    2.3 CpPMM基因原核表达分析
        2.3.1 CpPMM基因原核表达载体的构建
        2.3.2 pET-28a-CpPMM重组蛋白原核表达分析
        2.3.3 pET-28a-CpPMM重组蛋白的可溶性分析
    2.4 党参CpPMM基因不同发育时期根系表达分析
    2.5 党参多糖含量测定
3 结果与分析
    3.1 党参CpPMM基因cDNA序列的克隆
    3.2 党参CpPMM基因的生物信息学分析
    3.3 CpPMM氨基酸序列同源性比对与进化分析
    3.4 CpPMM基因原核表达分析
        3.4.1 CpPMM基因原核表达载体的构建
        3.4.2 pET-28a-CpPMM在大肠杆菌中的诱导表达及条件优化
        3.4.3 pET-28a-CpPMM重组蛋白的可溶性检测
    3.5 党参CpPMM基因不同发育时期根系表达分析
    3.6 党参多糖含量的测定
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同基源、产地对党参总多糖中低分子量果聚糖的影响[J]. 张霞,李建宽,曹玲亚,高建平.  中成药. 2020(01)
[2]道地药材“陇药”的形成与发展[J]. 杨丽,刘洋,陈建波,石秀佳,程亚茹,龚燚婷,董玲,孙裕.  中国中药杂志. 2019(24)
[3]白及PMM基因cDNA序列克隆及甘露糖合成相关基因的表达特性分析[J]. 许娟,石云平,苏祖祥,林茜,李小泉,韦绍龙,桂杰,胡一凤.  南方农业学报. 2019(09)
[4]宁夏中宁地区灵武长枣果实多糖的单糖成分GC-MS分析[J]. 章英才,苏伟东,柴雅红.  生物技术通报. 2019(11)
[5]党参化学成分及其体外抗氧化活性分析[J]. 张鑫,李建宽,赵玉静,高建平.  中国实验方剂学杂志. 2018(24)
[6]党参CpGAPDH基因的克隆及表达分析[J]. 王晓林,吉姣姣,高建平.  中国中药杂志. 2018(04)
[7]党参的化学成分研究[J]. 冯亚静,王晓霞,庄鹏宇,张丹阳,高磊,陈金铭,韩刚.  中国中药杂志. 2017(01)
[8]转磷酸甘露糖变位酶基因提高水稻维生素C含量[J]. 高利芬,夏志辉,张继,王道文,翟文学.  中国水稻科学. 2016(04)
[9]海带磷酸甘露糖变位酶（PMM）基因的克隆与表达分析[J]. 张朋艳,于雪,姚建亭,段德麟.  海洋科学. 2016(03)
[10]潞党参多糖含量测定[J]. 针娴,高建平,曹玲亚.  中华中医药学刊. 2014(03)

硕士论文
[1]栽培措施对党参生长和有效成分含量影响研究[D]. 胡佳栋.西北农林科技大学 2019
[2]向日葵茎芯多糖抗肺癌转移的活性与机制研究[D]. 吴比.东北林业大学 2019
[3]枸杞成熟过程中多糖差异分析及蛋白组学研究[D]. 赵宇慧.宁夏大学 2018
[4]党参多糖含量和组成分析及其对质粒DNA的保护作用研究[D]. 陈克克.陕西师范大学 2007



本文编号：2971468