当前位置:主页 > 科技论文 > 基因论文 >

拟南芥快速运输沉默突变体imos1基因的克隆

发布时间:2021-01-23 20:13
  外源基因在转基因植物稳定表达,是改变农艺性状和胁迫抗性的重要手段之一。但是在成功导入并且结构完整的情况下,仍会出现基因不能表达或者表达效率低下的问题,这种现象常常与基因沉默机制相关。其中RNA水平基因调控的基因沉默现象普遍存在,有研究表明韧皮部从源到各个库运输同化物同时也运输一些如m RNA与小RNA等生物大分子,且m RNA介导的基因沉默可以在细胞与细胞间传递,也可以进行从根到芽的长距离传递。目前对于基因沉默的长距离运输机制仍不甚明了,本试验立足基因沉默的长距离运输可以稳定遗传的拟南芥突变体,筛选与沉默速率相关基因并进行功能验证。本研究的主要结果如下:1)本实验利用基于EMS处理转基因Rt SS材料得到的沉默速率不同的可稳定遗传突变体材料imos1和GS6杂交构建F3代基因混合池,通过全基因组测序与WT比对分析差异SNP,得到9个候选基因:AT1G32230,AT1G47560,AT1G62580,AT3G09405,AT4G28050,AT4G30170,AT5G45960,AT5G56470,AT5G59740。2)基于前人研究基础,构建CRISPR/Cas系统p Cas Kan... 

【文章来源】:长江大学湖北省

【文章页数】:74 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

拟南芥快速运输沉默突变体imos1基因的克隆


拟南芥中研究细胞间和长距离RNA运动的转基因系统(Brosnan,etal.2011)

靶序列,锌指,剪切机


DNA 双螺旋模型的提出,到 70 年代基因工程的出现,人类从孟德尔遗传规律认识遗传现象逐渐过渡到通过基因改造干预遗传过程并发展出一系列技术如导入外源基因、基因沉默、基因编辑等。近十年来,利用基因工程改造的人工核酸酶实现了更高效和较精确的基因编辑。早期的基因组定点编辑技术,仅在小鼠[25]和果蝇[26]等少数模式生物中实现了同源重组介导的基因组定点编辑。随着蛋白质结构与功能研究的新突破和人工核酸内切酶新发展,我们根据基因编辑技术可技术产生的时间分成三代编辑技术,锌指核酸内切酶[27](ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶[28](TALEN)和 CRISPR/Cas9[29]。1996 年 Kim 和 Cha 等[30]将锌指结构与限制性内切酶 FokI 酶酶解中心串联结合,得到了锌指嵌合核酸酶,即传统意义上的锌指核酸酶。FokI 来自于海床黄杆菌,它是一种只在二聚体状态时才有酶切活性的限制性内切酶。每个 ZFN 都是由1 个 FokI 单体和 1 个 DNA 结合域相连构成的,当一对 ZFN 分别识别所对应的靶序列(通常 5-7 个碱基),并与之结合,激活 FokI 核酸内切酶,发挥剪切作用,导致核酸双链断裂(double strand breaks,DSB),然后细胞启动相关 DNA 修复机制,锌指对 DNA 的识别剪切机制见图 1-1。

照片,亲本,照片,荧光


图 2-1 亲本照片Fig.2-1 Photos of parentsF3代筛选选出苗后 10 天出现荧光沉默的植株,我现荧光沉默的植株,由图可看出图 2-2A 中选择一个株系进行 F3代观察鉴定沉默图 2-1 F

【参考文献】:
期刊论文
[1]拟南芥ABA受体与UGT71B6的相互作用研究[J]. 樊晶,马燕林,曹婧,陈乔乔,杨毅.  四川大学学报(自然科学版). 2019(02)
[2]利用CRISPR/Cas9技术创制水稻落粒性基因qSH1突变体及突变特征分析[J]. 盛夏冰,汪雪峰,谭炎宁,孙志忠,余东,袁贵龙,袁定阳,段美娟.  农业生物技术学报. 2019(02)
[3]拟南芥转录因子基因WRKY72的特性分析及其抗逆功能鉴定[J]. 李琪,李烨,牛芳芳,郭小华,赵新杰,吴相民,杨博,江元清.  农业生物技术学报. 2019(02)
[4]利用酵母双杂交系统筛选水稻类受体蛋白激酶FTPK1的互作蛋白[J]. 李颖秀,潘教文,李臻,王庆国,刘炜.  山东农业科学. 2019(01)
[5]烟草NtGCN2的原核表达、纯化及多克隆抗体制备[J]. 郝英辰,龙月,郭豪,李宁,张松杰,赵棋,张松涛.  农业生物技术学报. 2019(01)
[6]柑橘黄龙病病原CLIBASIA_03230基因的克隆及其编码蛋白的原核表达[J]. 赵国欢,张小兵,李凡,李为民.  云南农业大学学报(自然科学). 2019(01)
[7]拟南芥AFP4的克隆、原核表达和纯化及其与ABI5的互作[J]. 邓子兵,邱梁堃,马建忠.  浙江农业学报. 2018(12)
[8]小麦锰超氧化物歧化酶基因的克隆与原核表达[J]. 于永昂,张蕾,赵俊杰,贺杰,马振锋,胡海燕.  江苏农业科学. 2018(23)
[9]利用CRISPR/Cas9技术编辑水稻ROP基因OsRac5[J]. 王美娜,彭静静,王凯婕,安文静,刘亚菲,李珂嘉,梁卫红.  中国生物化学与分子生物学报. 2018(12)
[10]大豆GmLEA的分离及其在种子活力中的功能分析[J]. 周亚丽,朱雅婧,赵飞云,王爽,刘骕骦,郭凌凯,赵海红,麻浩.  中国农业科学. 2018(23)

博士论文
[1]拟南芥Exocyst复合体亚基SEC3A在花粉萌发中的功能研究[D]. 李岩.南京农业大学 2016



本文编号:2995855

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/2995855.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户bcaaf***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com