CRISPR cas9基因编辑方法系统性研究小鼠生物钟基因对温度补偿和细胞周期的调控
发布时间：2021-01-30 11:36
小鼠生物钟受到昼夜节律基因的调控,昼夜节律基因能够产生自我维持、自主振荡的以～24小时为周期的生物节律。昼夜节律中存在的一个主要的调节通路是核心生物钟组分BMAL1/CLOCK形成异二聚体,结合在转录抑制因子PER和CRY基因启动子的E-box区,激活per和cry的转录,当细胞质中PER和CRY达到一定浓度后,PER和CRY形成异二聚体入核使BMAL1/CLOCK从E-box上脱离,抑制其对自身的激活作用。除此之外,在小鼠细胞中,还有很多基因参与到生物钟的调控,如转录因子基因:mciart,mdbp.mnfil3,mdec1,mdec2,mnpas2;核受体家族基因:mrora,mrorb,mrorc和mnr1d1,mnr1d2,能够与mbmal 的RORE结合位点结合后分别作为正向和负向调控因子调节mbmal1的转录;介导PER和CRY蛋白泛素化降解的E3连接酶基因:mbeta-trcp和mfbxl21,mfbxl3;介导PER和CRY磷酸化的磷酸激酶家族基因:mcsnk1d,mcsnkle,以及目前在细胞水平昼夜节律相关研究不深入的mtimeless和mmyc。本论文的研究目的是...
【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１＿１哺乳动物生物钟分子模型??Ｆｉｇｌ．?１?Ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌｒ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｃｉｒｃａｄｉａｎ?ｉｎ?ｍａｍｍａｌ??
对细胞周期检验点的调控作用［：２：。??生物钟调节细胞周期主要涉及Ｇｌ?／?Ｓ和Ｇ２／Ｍ细胞周期时相的转换［７３］（见??图１．２－１?ｈＷＥＥｌ可以抑制细胞的有丝分裂进程，从從７基因启动子区有三个Ｅ－ｂｏｘ??５??
供了一种有效且简单的方法，例如引入单个核苷酸突变以探测遗传变异［９４］。??已经在多种细菌和古细菌宿主中鉴定了多种类型的ＣＲＩＳＰＲ系统，??ＣＲＩＳＰＲ－ｃａｓ９系统是效率最高的基因编辑系统之一（见图１．３－１），ＣＲＩＳＰＲ－ｃａｓ９??中通过优化ＲＮＡ向导的核酸酶ｃａｓ９的功能和必需的ＲＮＡ组分在哺乳动物细胞??中异源表达重建。此外，ｃｒＲＮＡ和ｔｒａｃｒＲＮＡ可以融合在一起以产生嵌合的单向??导ＲＮＡ?（ｓｇＲＮＡ）?Ｍ，可以通过ｓｇＲＮＡ内的２０－ｎｔ向导序列，将ｃａｓ９特异性导??向ＰＡＭ序列，在ＰＡＭ区序列前三个碱基处进行切割。鉴于其易于实施和多路??复用等优点，ｃａｓ９已被用于编辑真核细胞，通过ＮＨＥＪ和ＨＤＲ进行特异性突变。??通过共表达细菌ｃａｓ９核酸酶和向导ＲＮＡ，可以在哺乳动物细胞中实施??ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９基因编辑系统。在本研究过程中利用ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９基因编辑系统??对昼夜节律相关基因进行系统的编辑，研究基因编辑后对细胞生物节律周期，温??度补偿和细胞周期的影响，探宄昼夜节律基因对温度补偿及细胞周期的调控。??Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｌｏｃｕｓ?－－??■???—???Ｉ?Ｉ??Ｉ?Ｉ???????…?
【参考文献】：
期刊论文
[1]口腔鳞状细胞癌时辰化疗中国专家共识[J]. 杨凯,郭伟,孙沫逸,郑家伟,李龙江,唐瞻贵,任国欣,陈丹,吕晓强,张杰,韩正学,席庆,孙志军,陈晓品,张涛,车宗刚,冉炜,孟箭,黄桂林,唐洪,肖灿. 中国口腔颌面外科杂志. 2019(01)
[2]CRISPR/Cas9技术的脱靶效应及优化策略[J]. 郭全娟,韩秋菊,张建. 生物化学与生物物理进展. 2018(08)
本文编号：3008828
【文章来源】：安徽大学安徽省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１＿１哺乳动物生物钟分子模型??Ｆｉｇｌ．?１?Ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌｒ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｃｉｒｃａｄｉａｎ?ｉｎ?ｍａｍｍａｌ??
对细胞周期检验点的调控作用［：２：。??生物钟调节细胞周期主要涉及Ｇｌ?／?Ｓ和Ｇ２／Ｍ细胞周期时相的转换［７３］（见??图１．２－１?ｈＷＥＥｌ可以抑制细胞的有丝分裂进程，从從７基因启动子区有三个Ｅ－ｂｏｘ??５??
供了一种有效且简单的方法，例如引入单个核苷酸突变以探测遗传变异［９４］。??已经在多种细菌和古细菌宿主中鉴定了多种类型的ＣＲＩＳＰＲ系统，??ＣＲＩＳＰＲ－ｃａｓ９系统是效率最高的基因编辑系统之一（见图１．３－１），ＣＲＩＳＰＲ－ｃａｓ９??中通过优化ＲＮＡ向导的核酸酶ｃａｓ９的功能和必需的ＲＮＡ组分在哺乳动物细胞??中异源表达重建。此外，ｃｒＲＮＡ和ｔｒａｃｒＲＮＡ可以融合在一起以产生嵌合的单向??导ＲＮＡ?（ｓｇＲＮＡ）?Ｍ，可以通过ｓｇＲＮＡ内的２０－ｎｔ向导序列，将ｃａｓ９特异性导??向ＰＡＭ序列，在ＰＡＭ区序列前三个碱基处进行切割。鉴于其易于实施和多路??复用等优点，ｃａｓ９已被用于编辑真核细胞，通过ＮＨＥＪ和ＨＤＲ进行特异性突变。??通过共表达细菌ｃａｓ９核酸酶和向导ＲＮＡ，可以在哺乳动物细胞中实施??ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９基因编辑系统。在本研究过程中利用ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９基因编辑系统??对昼夜节律相关基因进行系统的编辑，研究基因编辑后对细胞生物节律周期，温??度补偿和细胞周期的影响，探宄昼夜节律基因对温度补偿及细胞周期的调控。??Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｌｏｃｕｓ?－－??■???—???Ｉ?Ｉ??Ｉ?Ｉ???????…?
【参考文献】：
期刊论文
[1]口腔鳞状细胞癌时辰化疗中国专家共识[J]. 杨凯,郭伟,孙沫逸,郑家伟,李龙江,唐瞻贵,任国欣,陈丹,吕晓强,张杰,韩正学,席庆,孙志军,陈晓品,张涛,车宗刚,冉炜,孟箭,黄桂林,唐洪,肖灿. 中国口腔颌面外科杂志. 2019(01)
[2]CRISPR/Cas9技术的脱靶效应及优化策略[J]. 郭全娟,韩秋菊,张建. 生物化学与生物物理进展. 2018(08)
本文编号：3008828
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