细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克

发布时间：2021-02-12 04:35

　　目的对细粒棘球绦虫转醛醇酶（Echinococcus granulosus transaldolase,EgTAL）编码基因进行生物信息学分析、克隆和表达,并对其作为药物靶标及其潜在的免疫诊断价值进行初步评价。方法运用多种软件分析EgTAL的理化性质、保守功能域、同源性和三级结构等。从重组质粒pBluescript ⅡSK Egtal中PCR扩增Egtal基因,克隆至pET30a,构建表达载体pET30a-Egtal,转化大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21（DE3）,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物,抗His标签镍亲和层析柱纯化重组蛋白EgTAL,与细粒棘球蚴病患者血清进行蛋白质印迹（Western blotting）分析。用20份已确诊的细粒棘球蚴病患者血清和20份健康者血清,ELISA法评价重组蛋白EgTAL的免疫诊断效果。分光光度法检测重组蛋白EgTAL的酶活性。结果 Egtal基因长981 bp,编码的蛋白含326个氨基酸,理论相对分子质量（M_r）为36... 

【文章来源】：中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2017,35(04)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、质粒、血清
    1.2 主要试剂
    1.3 Eg TAL生物信息学分析
    1.4 引物设计及合成
    1.5 Egtal基因的克隆及重组质粒的构建
    1.6 Eg TAL的原核表达及纯化
    1.7 Eg TAL的蛋白质印迹 （Western blotting） 分析
    1.8 Eg TAL的ELISA检测
    1.9 Eg TAL的酶活性检测
2 结果
    2.1 生物信息学分析结果
        2.1.1 Eg TAL理化性质分析
        2.1.2 保守功能域、跨膜区、信号肽预测
        2.1.3 序列同源性及分子进化树分析
        2.1.4 三级结构分子建模分析
    2.2 Egtal的扩增、重组表达质粒的鉴定
    2.3 Eg TAL的表达、纯化及Western blotting分析
    2.4 重组蛋白Eg TAL的ELISA检测
    2.5 重组蛋白Eg TAL酶活性测定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3030269