钙信号通路相关基因在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达及其与吡喹酮体外作用的相关性研究

发布时间：2021-02-14 01:50

　　目的:研究细粒棘球绦虫钙信号通路基因的家族成员（Cam KII、Cavβ1）在虫体发育的各个阶段（棘球蚴生发层、原头蚴及成虫）基因表达的差异,同时利用荧光定量PCR技术研究吡喹酮（PZQ）体外干预细粒棘球绦虫后两基因的表达情况,推测PZQ的作用靶点。方法:分别从细粒棘球绦虫的成虫、原头蚴以及棘球蚴生发层中提取总RNA,用Revert Aid First Strand c DNA Synthesis kit反转录成c DNA,根据Cam KII基因序列及Cavβ1基因序列设计跨越内含子的基因特异性引物,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术,选用β-actin为内参基因,通过由质粒DNA建立的标准曲线分别对Cam KII基因及Cavβ1基因进行定量分析;通过从人工感染30天的比格犬的小肠中获得细粒棘球绦虫成虫,体外短暂培养后留作实验用,以3天为干预周期,原头蚴及包囊为对照组,以不同浓度的为PZQ体外干预浓度,扫描电镜（SEM）与透射电镜（TEM）观察PZQ干预成虫后体表结构以及超微结构的变化。同时,收集各浓度组的成虫样本进行总RNA的提取,逆转录为c DNA,利用q RT-PCR... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同发育阶段总RNA1%琼脂糖凝胶电泳图

M: DNA 分子质量标准 1 EgActin 2 EgCavβ13 EgCamKIIM DL2000 DNA marker 1 EgActin 2 EgCavβ13 EgCamKII图 2 PCR 产物 1%琼脂糖凝胶电泳图Fig.2 The 1%agarose gelelectrophoresis of PCR products粒阳性克隆鉴定结果物与 pEASY-T1 载体连接后并转化进感受态 DH5 细胞中，培上长出大量的单克隆菌落，随机挑选若干单克隆菌落进行 P为转化成功的阳性菌落。PCR 鉴定结果为所挑选的单克隆均），它们均为转化成功的阳性菌落。

A 分子质量标准 1 EgActin 2 EgCavβ13 Eg2000 DNA marker 1 EgActin 2 EgCavβ13 Eg图 2 PCR 产物 1%琼脂糖凝胶电泳图ig.2 The 1%agarose gelelectrophoresis of PCR produ克隆鉴定结果EASY-T1 载体连接后并转化进感受态 DH5 细大量的单克隆菌落，随机挑选若干单克隆菌落成功的阳性菌落。PCR 鉴定结果为所挑选的单均为转化成功的阳性菌落。

【参考文献】：
期刊论文
[1]家畜棘球蚴病的防治[J]. 余家会.  中国畜牧兽医文摘. 2015(11)
[2]肝包虫病的诊治探讨[J]. 李士辉.  世界最新医学信息文摘. 2015(38)
[3]包虫病的治疗研究进展[J]. 孙艳红,杨亚明.  热带病与寄生虫学. 2015(01)
[4]甘南州牧区包虫病的调查及防治措施[J]. 王芳.  中国畜牧兽医文摘. 2014(07)
[5]2010年全国血吸虫病疫情通报[J]. 雷正龙,郑浩,张利娟,朱蓉,郭家钢,李石柱,王立英,陈朝,周晓农.  中国血吸虫病防治杂志. 2011(06)
[6]细胞松弛素D与钙通道阻滞剂拮抗吡喹酮作用对血吸虫超微结构的影响[J]. 蔡茹,杨巧林,张惠琴,夏超明.  中国人兽共患病学报. 2010(04)
[7]钙通道阻滞剂与肌动蛋白解聚/稳定剂对吡喹酮体外杀日本血吸虫作用的效应影响[J]. 蔡茹,李欣,张惠琴,恭唯,骆伟,夏超明.  中国人兽共患病学报. 2009(12)
[8]日本血吸虫钙离子通道变异β亚基基因在成虫和童虫期转录本的分析[J]. 田欣,张玲,徐斌,莫晓瑾,胡薇.  中国血吸虫病防治杂志. 2009(05)
[9]2003年新疆包虫病流行病学调查报告[J]. 伊斯拉音·乌斯曼,童苏祥,孟贺巴特,张松,斯康德尔,李雄,牛新玲,茹孜古丽·朱马洪,程风清,马江平.  地方病通报. 2009(01)
[10]吡喹酮处理日本血吸虫成虫蛋白质组学分析[J]. 张玲,刘峰,崔书健,徐斌,周晓农,胡薇.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2008(04)

硕士论文
[1]日本血吸虫吡喹酮抗性株的生物学特性及免疫病理的研究[D]. 钱科.江苏省血吸虫病防治研究所 2013



本文编号：3032925