贻贝粘合蛋白Mgfp-5基因在菊苣中的表达研究

发布时间：2021-02-24 08:03

　　贻贝粘合蛋白（Mussel Adhesive Protein,MAPs）,亦称贻贝足丝蛋白（Mytilus foot proteins,Mfps）是海洋软体动物贻贝（Mytilidae）足部的足丝腺分泌的一类具有极强黏性的蛋白质复合物。由于其液体环境下的强黏合能力、可降解性和极好的生物相容性的生物特点,常被用作生物医药粘合剂及优质的医用粘合剂。天然的MAPs,提取时易固化、含量低且成本高,研究者开始借助基因工程技术,在原核表达（大肠杆菌）及真核表达（酵母、烟草）系统中重组表达MAPs,探索重组蛋白的性质及功能。原核表达的重组MAPs需在体外经酪氨酸酶修饰后,才有一定的黏性,且表达量或者黏附性能均不如意;真核表达系统可以表达重组MAPs的基因,但是真核重组蛋白的表达量及重组蛋白的性能研究还没见到相关资料。植物表达系统中有着比较高级的真核蛋白合成途径,表达外源蛋白时可以在植物体内进行糖基化和磷酸化等修饰,在重组蛋白的体外修饰中就可降低成本,减少体外修饰带来的毒性,有着安全性和规模化生产的优点。已有在烟草中重组表达地中海贻贝粘合蛋白（Mytilus galloprovincialis Foo... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 贻贝研究进展
        1.1.1 背景
        1.1.2 贻贝粘合蛋白的结构与分类
        1.1.3 贻贝粘合蛋白的黏附机制
        1.1.4 贻贝粘合蛋白的获取
        1.1.5 贻贝粘合蛋白功能的测定
        1.1.6 贻贝粘合蛋白用于组织粘合剂
    1.2 菊苣
        1.2.1 菊苣的用途
        1.2.2 菊苣的转基因研究
    1.3 本工作的理论依据及意义
    1.4 本工作的主要研究内容
第二章 实验材料及方法
    2.1 材料与试剂
        2.1.1 植物受体材料
        2.1.2 相关仪器
        2.1.3 主要试剂及试剂盒
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 菊苣离体再生体系的建立
        2.2.2 菊苣叶片对卡那霉素的敏感性测定
        2.2.3 农杆菌介导的菊苣遗传转化体系
        2.2.4 植物的DNA提取和PCR检测转化后材料的体系
        2.2.5 农杆菌介导法转化条件优化
        2.2.6 转化菊苣的获得与移栽
        2.2.7 转基因菊苣的鉴定
1代转基因菊苣植株的获取及鉴定">        2.2.8 T₁代转基因菊苣植株的获取及鉴定
        2.2.9 转基因菊苣中重组蛋白Mgfp-5鉴定
        2.2.10 重组蛋白Mgfp-5的微量黏附评价
第三章 实验结果与分析
    3.1 菊苣再生体系条件的优化
    3.2 菊苣的卡那霉素敏感性确定
    3.3 农杆菌介导遗传转化体系的优化
        3.3.1 外植体预培养时间对转化效率的影响
        3.3.2 农杆菌的侵染浓度和侵染时间对转化效率的影响
        3.3.3 外植体共培养时间对转化效率的影响
    3.4 转Mgfp-5基因的转化菊苣的获得
    3.5 转化菊苣的分子生物学鉴定
0代转化菊苣Mgfp-5基因的PCR检测">        3.5.1 T₀代转化菊苣Mgfp-5基因的PCR检测
0代转化菊苣Mgfp-5基因的RT-PCR检测">        3.5.2 T₀代转化菊苣Mgfp-5基因的RT-PCR检测
1代转基因植株的培养及基因Mgfp-5的稳定性分析">    3.6 T₁代转基因植株的培养及基因Mgfp-5的稳定性分析
1代转基因菊苣的表型">        3.6.1 T₁代转基因菊苣的表型
1代转基因菊苣的分子学鉴定">        3.6.2 T₁代转基因菊苣的分子学鉴定
1代转基因菊苣基因分离的初步分析">        3.6.3 T₁代转基因菊苣基因分离的初步分析
    3.7 重组Mgfp-5蛋白在菊苣中的表达与纯化
    3.8 重组Mgfp-5蛋白的微观黏附分析
        3.8.1 重组Mgfp-5蛋白的表面粗糙度
        3.8.2 重组Mgfp-5蛋白的吸附能力
第四章 小结与讨论
    4.1 受体植物的选择及其再生体系的优化
    4.2 农杆菌介导法转化菊苣受体的条件优化
        4.2.1 菊苣对卡那霉素敏感性
        4.2.2 农杆菌介导遗传转化体系的优化
    4.3 转Mgfp-5基因菊苣的分子生物学鉴定
    4.4 菊苣中重组Mgfp-5蛋白的表达与提纯
        4.4.1 重组Mgfp-5蛋白的表达
        4.4.2 重组Mgfp-5蛋白的提纯
    4.5 重组Mgfp-5蛋白的微观黏附
论文主要结论、创新点与展望
    1 主要结论
    2 本研究的特色与创新
    3 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间主要的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]贻贝粘蛋白Mgfp-5基因在烟草中的转化[J]. 吕玉伟,张雨靖,吕亚维,王睿劼,杨泽熵,王英娟.  基因组学与应用生物学. 2016(01)
[2]农杆菌介导含硫氨基酸γ-zein转化菊苣的初步研究[J]. 张玉,白史且,李聪.  草业学报. 2015(09)
[3]菊苣的药理药效研究进展[J]. 孙博喻,张冰,林志健,黄胜男,王红坡.  中华中医药学刊. 2015(07)
[4]人ATG4B的表达及蛋白纯化和鉴定[J]. 黄蓉,徐小洁,梁迎春,张立,王涛,周丽英,杜楠,叶棋浓.  细胞与分子免疫学杂志. 2015(02)
[5]以G418抗性为筛选标记的深绿木霉遗传转化研究[J]. 唐俊,马越,王姝妹,徐孟竹,刘生杰,陈捷.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(12)
[6]贻贝粘性蛋白组成、作用机理与应用[J]. 朱曜曜,丁海兵,孙承君.  海洋科学进展. 2014(04)
[7]贻贝粘蛋白的粘附成膜机理及应用研究进展[J]. 王贵学,兰华林,王溢,尹铁英,王亚洲,刘茜,王召旭.  功能材料. 2014(14)
[8]不同组培基质对菊苣叶片再生的影响[J]. 张玉,白史且,李达旭.  草地学报. 2014(01)
[9]菊苣的栽培与利用[J]. 周大荣,田松,涂鑫,宋德荣,黎智勇,周训海,费文贤,邱仁燕.  畜牧与饲料科学. 2013(12)
[10]植物组织培养中褐化的机理及对策[J]. 余红英.  河南科技. 2013(21)

博士论文
[1]atnhx1和hvbadh1基因的克隆及对三种植物的转化研究[D]. 赵宇玮.西北大学 2007

硕士论文
[1]能源草菊苣的化感活性研究[D]. 解宝.西北农林科技大学 2012
[2]海洋贻贝粘附蛋白新型生物粘合剂的研究[D]. 刘加鹏.厦门大学 2008



本文编号：3049063