结构精确的富勒烯核杂臂星形聚合物的制备及其在纳米闪光、基因调控方面的应用

发布时间：2021-03-01 06:10

　　寡核苷酸是一类在多种疾病的诊断和治疗方面具有极大应用前景的生物药物,其中包括癌症、神经病变和代谢紊乱等难以治愈的疾病。但由于未经修饰的寡核苷酸存在易被机体快速清除、酶稳定性差、细胞摄取能力低,以及存在激活固有免疫反应等风险,寡核苷酸药物向临床转化受到严重阻碍。为解决上述问题进而发展了寡核苷酸输送载体（如阳离子聚合物、脂质体、纳米颗粒等）和化学修饰的寡核苷酸,但它们均存在细胞毒性、效率低下等问题,因此仍需要开发安全高效的寡核苷酸输送体系。基于此,本论文开展了以下两方面的研究工作:1.设计合成了一类分子结构精确,以富勒烯C₆₀为核心,聚乙二醇和寡核苷酸共修饰的杂臂星形聚合物(以下简称C₆₀ pacDNA)。选用了表面修饰有12个叠氮基团,分子直径约为5 nm(假定C₆₀核分子中连接链的所有键均处于完全拉伸的构型)的C₆₀分子为星形聚合物的核心,其表面反应位点分布相对紧凑,有利于得到PEG密度高的偶联物,同时C₆₀核分子的化合价数目并不高,可以得到完全官能化的偶联物。将二苯基环辛炔（... 

【文章来源】：湖南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
本文所用英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 引言
    1.2 寡核苷酸药物
        1.2.1 反义寡核苷酸
        1.2.2 小分子干扰RNA
        1.2.3 核酸适配体
    1.3 新型寡核苷酸输送体系
        1.3.1 球形核酸
        1.3.2 聚合物辅助压实核酸
    1.4 纳米闪光
    1.5 本论文的选题背景及主要工作
第2章 聚乙二醇-寡核苷酸修饰富勒烯核杂臂星形聚合物的制备
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验仪器和试剂
60核的制备">        2.2.2 C₆₀核的制备
60 pacDNA的制备">        2.2.3 C₆₀ pacDNA的制备
60 pacDNA纳米闪光的制备">        2.2.4 C₆₀ pacDNA纳米闪光的制备
        2.2.5 凝胶电泳
        2.2.6 DNA定量
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 设计原理
60核的表征">        2.3.2 C₆₀核的表征
        2.3.3 DNA和偶联物的纯化与表征
        2.3.4 PEG-DBCO的纯化和表征
60 pacDNA的纯化与表征">        2.3.5 C₆₀ pacDNA的纯化与表征
60 pacDNA粒径大小表征">        2.3.6 C₆₀ pacDNA粒径大小表征
60 pacDNA纳米闪光的表征">        2.3.7 C₆₀ pacDNA纳米闪光的表征
    2.4 小结
第3章 聚乙二醇-寡核苷酸富勒烯核杂臂星形聚合物在纳米闪光和基因调控方面的研究
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验仪器和试剂
60 pacDNA对寡核苷酸酶的稳定性检测">        3.2.2 C₆₀ pacDNA对寡核苷酸酶的稳定性检测
        3.2.3 纳米闪光对寡核苷酸酶的稳定性检测
        3.2.4 纳米闪光对目标DNA的响应
        3.2.5 细胞的培养
        3.2.6 共聚焦显微镜的测定
        3.2.7 流式细胞分析
        3.2.8 蛋白印迹分析
        3.2.9 细胞毒性检测
    3.3 结果讨论
        3.3.1 反应原理
60 pacDNA对寡核苷酸酶的抑制作用">        3.3.2 C₆₀ pacDNA对寡核苷酸酶的抑制作用
60 pacDNA纳米闪光的体外检测">        3.3.4 C₆₀ pacDNA纳米闪光的体外检测
60 pacDNA纳米闪光对细胞的响应">        3.3.5 C₆₀ pacDNA纳米闪光对细胞的响应
60 pacDNA的细胞摄取研究">        3.3.6 C₆₀ pacDNA的细胞摄取研究
60 pacDNA的基因调控">        3.3.7 C₆₀ pacDNA的基因调控
60 pacDNA的细胞毒性研究">        3.3.8 C₆₀ pacDNA的细胞毒性研究
    3.4 小结
结论与展望
参考文献
附录 攻读硕士期间所发表的学术论文
致谢



本文编号：3057066