松材线虫Bxy-mab-3基因的表达特性与功能验证研究

发布时间：2021-03-01 07:26

　　松材线虫病是一种世界性的检疫性病害,在多个国家造成巨大的经济损失和生态灾难。前期研究发现,松材线虫在不同的环境条件下的雌雄性别比例存在显著的差异,但有关松材线虫的性别决定与分化研究国内外鲜有报道,引起松材线虫性别比例变化的内在分子机制尚不清楚。对秀丽隐杆线虫的研究结果表明,mab-3是调控性别分化的重要基因,该基因在不同物种之间具有较高的保守性。本文在前期研究的基础上,对松材线虫Bxy-mab-3基因的时空动态表达特性和生物学功能开展了深入系统的研究。研究结果如下:1、松材线虫Bxy-mab-3基因编码410个氨基酸,具有MAB-3家族蛋白两个保守的DM功能结构域,分别位于第58和101、第124和171个氨基酸之间。2、in situ原位杂交结果表明,Bxy-mab-3基因在松材线虫的二龄幼虫（J2）、三龄幼虫（J3）、四龄幼虫（J4）和雄性成虫中均有表达,但在胚胎期和雌性成虫中不表达。在J2期,Bxy-mab-3主要在中肠系统中离散式表达,J3期在整个中肠系统中都有表达,J4期雄性和雌性幼虫的整个身体都有表达,但成虫期表达出现性别分化,雄性成虫只在交合刺部位特异性表达,在雌体个体内... 

【文章来源】：浙江农林大学浙江省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

松材线虫成虫性腺在线虫内部的示意图

10的性腺中，可以观察到明显的卵原细胞、初级卵母细胞和次级卵母细胞。同样的，在雄虫性腺内也可以清楚地观察到精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞。图1.2松材线虫J4雌雄虫的区分示意图Figure1.2DifferentiationofJ4femaleandmaleofBursaphelenchusxylophilus注：（A）雌性J4幼虫；（B）雄性J4幼虫；（A1）雌性J4幼虫尾部放大图。红色圈，雌性J4幼虫初步发育的阴户，箭头处为雌性J4幼虫尾部对比雄性J4幼虫明显收腰处；（B1）雄性J4幼虫尾部放大图。绿色圈，雄性J4幼虫性腺中次级精母细胞。秀丽隐杆线虫可以在身体内部贮存大量成熟的精子。而在对松材线虫的形态观察中发现，松材线虫并不能储藏大量精子，而是在输精管靠近交合刺附近可以观察到有四个精子。但在松材线虫雄性成虫的性腺中，可以观察到有大量的“单个”的细胞紧密排列，这可能是已经完成核分裂的松材线虫的精子，在松材线虫进行交配的时候迅速分裂分化成成熟的精子注入雌虫体内，完成交配。

23个重复，在体视显微镜下8h内持续观察雌雄虫的交配行为并记录分析，在24h后观察记录产卵情况，重复5次实验。图2.1松材线虫干扰24h后处女雌雄虫交配行为实验设计Fig.1FramworkofbehaviortestinmatingprocessbetweenvirginmaleandfemaleadultsafterbeinginterferencedbyBxy4022genewithsoakingfor24hinBursaphelenchusxylophilus2.11数据处理与分析性别比和体型以平均值±标准差表示。在独立样本t检验的基础上，用SPSS18.0进行了统计学分析（SPSSInc.，Chicago，IL，UnitedStates）。当p<0.05时，数据被认为具有统计学意义。

【参考文献】：
期刊论文
[1]武昌罗索线虫线粒体基因组分析[J]. 何芳,姜爱兰,赵娜娜,刘卉,王国秀.  中国生物防治. 2010(01)
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[3]寄生于蚊类的罗索线虫属一新种:武昌罗索线虫[J]. 鲍学纯,汪义慰,伍惠生.  华中师范大学学报(自然科学版). 1985(03)



本文编号：3057145