山胡椒果实LgBASS2和LgMPC2基因克隆与表达分析
发布时间：2021-03-08 19:56
山胡椒（Lindera glauca）,系樟科山胡椒属（Lindera Thunb.）的芳香植物,广泛分布于中国秦岭及淮河以南各个省区,其果实中含有大量芳香油,可供于食用和药用,极具开发利用价值。本研究基于实验室前期获得的山胡椒果实转录组数据,对其进一步注释和筛选得到参与萜类前体物质丙酮酸转运的两个基因LgBASS2和LgMPC2,开展其全长序列克隆及表达载体构建与遗传转化拟南芥研究,进而通过对质体LgBASS2和线粒体LgMPC2转基因拟南芥植株的表型和基因表达分析,探究两种丙酮酸转运蛋白对山胡椒果实萜类合成代谢的影响;同时,开展基于染色体步移技术的LgBASS2基因启动子序列克隆及其顺式作用元件的预测分析,通过重组植物表达载体构建以及烟草瞬时转化和GUS组织化学染色分析,以期明确LgBASS2基因启动子的组织表达特性和顺式作用元件种类。通过上述研究,可得到如下主要结果:1.成功克隆得到山胡椒果实的丙酮酸转运蛋白基因LgBASS2和LgMPC2,两者序列长度分别为1,251 bp和327 bp;借助生物信息学手段和相关软件,分别对二者的核酸序列和编码蛋白的氨基酸进行分析,并对基因编码...
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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＆Ｓ２和ＭＰＣ２基因的克隆及生物信息学分析???２．３结果与分析??２．３．１山胡椒果实总ＲＮＡ的获取??利用ＲＮ５３－ＥＡＳＹｓｐｉｎ?Ｐｌｕｓ多糖多酚／复杂植物ＲＮＡ快速提取试剂盒，提取获得??山胡椒果实总ＲＮＡ，电泳结果表明，２８Ｓ?ｒＲＮＡ和１８Ｓ?ｒＲＮＡ两条比较清晰、而５Ｓ?ｒＲＮＡ??条带较浅；此外，２８ＳｒＲＮＡ条带的亮度是１８ＳｒＲＮＡ的２倍，这说明从山胡椒果实??中提取得到的总ＲＮＡ降解少、产量高，可用于后续分子生物学实验。??２８Ｓ??１８Ｓ?Ｐ??图２－１山胡椒果实总ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｌ．?＾ｌａｕｃａ?ｆｒｕｉｔｓ??２．３．２山胡椒果实和ＡｇＡ／ＰＣ？基因编码区序列的克隆??以山胡椒果实总ＲＮＡ为模板，通过ＮＣＢＩ上ＯＲＦ?ｆｉｎｄｅｒ在线工具，分析山胡椒??果实和ＭＰＣ２基因的幵放阅读框ＯＲＦ?（Ｏｐｅｎ?ｒｅａｄｉｎｇ?ｆｒａｍｅ），可知两个序列从??３８４－１６８４?ｂｐ和１２０－４４６?ｈｐ各自分别构成一个完整的开放阅读框，可分别编码４１６和??１０８个氨基酸。通过ＰＣＲ扩增得到大小约１３００?ｂｐ和３５０?ｂｐ片段，将片段进行切胶??回收之后连接载体进行测序，通过与己知片段进行对比，证明为目的基因，大小分别??为丨２５１?ｂｐ和３２７?ｂｐ?（图２－２?），分别命名为和基因。??ａ?Ｍ?１?ｂ?ｍ?２??ＩＢ??—ｗｓｉｂｐ??ｏｏｏｂｐ??２＆０ｂｐ??Ｂ９??图２－２山胡椒果实Ｚ＾５／＾２和基因扩梢屯泳阁??注：ａ：?扩增电泳图，１：?Ｌｇ５必Ｓ２基因扩增产物，ｂ：?
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本文编号：3071584
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１萜类物质合成代谢途径??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ａｎａｂｏｌｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｔｅｒｐｅｎｅｓ??
＆Ｓ２和ＭＰＣ２基因的克隆及生物信息学分析???２．３结果与分析??２．３．１山胡椒果实总ＲＮＡ的获取??利用ＲＮ５３－ＥＡＳＹｓｐｉｎ?Ｐｌｕｓ多糖多酚／复杂植物ＲＮＡ快速提取试剂盒，提取获得??山胡椒果实总ＲＮＡ，电泳结果表明，２８Ｓ?ｒＲＮＡ和１８Ｓ?ｒＲＮＡ两条比较清晰、而５Ｓ?ｒＲＮＡ??条带较浅；此外，２８ＳｒＲＮＡ条带的亮度是１８ＳｒＲＮＡ的２倍，这说明从山胡椒果实??中提取得到的总ＲＮＡ降解少、产量高，可用于后续分子生物学实验。??２８Ｓ??１８Ｓ?Ｐ??图２－１山胡椒果实总ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｌ．?＾ｌａｕｃａ?ｆｒｕｉｔｓ??２．３．２山胡椒果实和ＡｇＡ／ＰＣ？基因编码区序列的克隆??以山胡椒果实总ＲＮＡ为模板，通过ＮＣＢＩ上ＯＲＦ?ｆｉｎｄｅｒ在线工具，分析山胡椒??果实和ＭＰＣ２基因的幵放阅读框ＯＲＦ?（Ｏｐｅｎ?ｒｅａｄｉｎｇ?ｆｒａｍｅ），可知两个序列从??３８４－１６８４?ｂｐ和１２０－４４６?ｈｐ各自分别构成一个完整的开放阅读框，可分别编码４１６和??１０８个氨基酸。通过ＰＣＲ扩增得到大小约１３００?ｂｐ和３５０?ｂｐ片段，将片段进行切胶??回收之后连接载体进行测序，通过与己知片段进行对比，证明为目的基因，大小分别??为丨２５１?ｂｐ和３２７?ｂｐ?（图２－２?），分别命名为和基因。??ａ?Ｍ?１?ｂ?ｍ?２??ＩＢ??—ｗｓｉｂｐ??ｏｏｏｂｐ??２＆０ｂｐ??Ｂ９??图２－２山胡椒果实Ｚ＾５／＾２和基因扩梢屯泳阁??注：ａ：?扩增电泳图，１：?Ｌｇ５必Ｓ２基因扩增产物，ｂ：?
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本文编号：3071584
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