EC-SOD基因修饰BMSCs移植治疗脑梗死大鼠的实验研究

发布时间：2021-03-09 12:21

　　目的探究胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）基因修饰后的骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗对脑梗死大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法体外分离培养大鼠BMSCs,将在293T细胞中培养的含EC-SOD序列的载体转染至BMSCs细胞,免疫印迹法检测细胞中EC-SOD蛋白表达验证EC-SOD转染情况。Zea-longa线栓法建立脑梗死大鼠模型,建模成功后分为模型组（注射150 mmol/L PBS缓冲液10μL）、BMSCs组（注射BMSCs细胞悬液,细胞密度为1×10⁵个/μL×10μL）、MSCs+EC-SOD组（注射转染EC-SOD表达载体的BMSCs细胞悬液1×10⁵个/μL×10μL）,对照组（不造模,仅结扎颈外远端动脉对照处理;注射150 mmol/L PBS缓冲液10μL）,每组15只大鼠。以神经功能缺损（mNSSS）评分评定大鼠神经功能缺损情况,TTC染色法检测脑梗死面积,免疫荧光法检测脑组织中EC-SOD表达情况,Tunel染色检测脑组织细胞凋亡情况,免疫印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、B淋巴细胞... 

【文章来源】：中国神经免疫学和神经病学杂志. 2020,27(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

免疫印迹法检测各组脑组织Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达情况

荧光显微镜显示,转染效率达80%。与空白组、阴性转染组相比,EC-SOD过表达组EC-SOD蛋白表达均显著升高(F=311.409,0.24±0.03比0.94±0.09,q=31.978;0.26±0.05 比0.94±0.09,q=31.065;均P<0.05。见图2～3)。图2 BMSCs细胞EC-SOD过表达载体转染情况（免疫荧光）

表1 各组大鼠移植治疗后大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织中EC-SOD阳性率、脑组织细胞凋亡率及相关蛋白表达比较 ( x ˉ ±s ) 组别 mNSSS评分 脑梗死面积比例(%) EC-SOD阳性率(%) 凋亡率(%) Caspase-3 Bax Bcl-2 对照组 0 0 21.78±5.04 6.64±1.34 0.62±0.04 0.86±0.11 1.38±0.14 模型组 3.56±0.62* 36.74±4.37* 20.56±5.49* 33.64±2.58* 1.34±0.19* 1.17±0.13* 0.21±0.06* BMSCs组 2.53±0.49# 24.79±3.84# 22.53±5.79 25.72±2.73# 0.88±0.08# 0.75±0.07# 0.43±0.08# BMSCs+EC-SOD组 1.28±0.21#a 15.27±3.66#a 47.78±7.21#a 18.36±2.26#a 0.73±0.09# 0.51±0.08#a 0.61±0.07# F值 213.391 122.441 43.823 225.691 69.213 67.020 270.008 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 注:Caspase-3:半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3,Bcl-2:B淋巴细胞瘤-2基因,Bax:Bcl-2相关X蛋白,图4同;mNSSS评分:神经功能缺损评分;mNSSS评分n=15,脑梗死面积n=6,EC-SOD阳性率、凋亡率、Caspase-3、Bax、Bcl-2 n=9;与对照组相比,*P<0.05;与模型组相比,#P<0.05;与BMSCs组相比,aP<0.052.3 各组大鼠移植治疗后大鼠mNSSS评分、脑梗死面积、脑组织中EC-SOD、脑组织细胞凋亡比较

【参考文献】：
期刊论文
[1]脑梗死患者外周血调节性B细胞水平及其与颈动脉粥样硬化严重程度的相关性[J]. 曾佩,袁江,王云甫.  中国神经免疫学和神经病学杂志. 2019(01)
[2]骨髓间充质干细胞移植对实验性大鼠缺血性脑梗死免疫炎性反应的影响研究[J]. 何霞,崔璨,陈敏.  中国免疫学杂志. 2018(05)



本文编号：3072841