α-（1,2）岩藻糖转移酶Ⅱ基因过表达对胰腺癌细胞功能的影响/血清CA19-9正常型胰腺癌临床研究/引入脉管瘤栓对第8版

发布时间：2021-03-14 15:05

　　目的:构建FUT2基因过表达慢病毒载体,并使用此载体转染胰腺癌PaCa-2细胞,构建FUT2基因过表达的PaCa-2细胞,初步探索FUT2基因过表达对胰腺癌PaCa-2细胞功能的影响,并为今后进一步研究FUT2的作用机制奠定基础。方法:（1）FUT2基因慢病毒载体的构建:PCR扩增FUT2基因,电泳鉴定正确后与慢病毒载体连接,将构建好的FUT2慢病毒载体进行转化并通过电泳和基因测序进行鉴定;使用正确的FUT2慢病毒载体和混合质粒共转染293T细胞,将产生的病毒颗粒过滤和浓缩,之后进行质检。（2）FUT2基因过表达胰腺癌PaCa-2细胞构建:使用先前构建的病毒颗粒感染胰腺癌PaCa-2细胞,使用药物筛选FUT2过表达胰腺癌PaCa-2细胞株;利用实时荧光定量PCR和Western Blot方法检测慢病毒后胰腺癌PaCa-2细胞中FUT2基因在mRNA水平与蛋白水平上的表达变化。（3）功能试验:通过CCK-8细胞增殖实验、Trans-well侵袭实验、划痕试验、流式细胞凋亡实验检测FUT2基因过表达对胰腺癌PaCa-2细胞增殖、迁移、转移能力及凋亡情况的影响。结果:经电泳实验和基因测序鉴定... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．病毒载体构建流程图??２．ＰＣＲ扩增目的基因片段??根据ＧｅｎＢａｎｋ中人类ＦＵＴ２基因序列（ＮＭ－０００５１１），设计ｆ分别含ＦＵＴ２基??因ＣＤＳ区５？端及３’端部分序列的一对引物，用于ＰＣＲ钓取ＦＵＴ２基因

图２载体图谱??

图３．?ｐＨｅｌｐｅｒ?１．０质粒图谱（Ａ）和ｐＨｅｌｐｅｒ?２．０质粒图谱（Ｂ）??

【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞表面糖链末端唾液酸和岩藻糖与某些细胞生物学行为的关系[J]. 张英,张夏英,刘飞,齐慧玲,陈惠黎.  实验生物学报. 2002(04)



本文编号：3082414