PEI磁珠吸附IBRV主要囊膜蛋白基因的DNA疫苗的构建

发布时间：2021-03-24 10:28

　　通过利用实验已经构建好的表达IBRVgB/gC/gD囊膜蛋白的真核表达质粒（pCDNA4-gB-His、pCDNA4-gC-His、pCDNA4-gD-His）为免疫原,以PEI磁珠为载体,PEG为保护层构建DNA疫苗。将构建好的真核表达质粒,通过鉴定、扩增、大提后,使PEI磁珠与其吸附并转染至小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）鉴定蛋白表达情况,此后进行疫苗制备并通过电镜观察其形态特征。结果表明:三种蛋白均能在小鼠细胞中表达,所制备DNA疫苗在电子显微镜下可观察到PEG包裹在最外层,粒径均在100 nm以内。成功构建了以PEI磁珠吸附IBRV gB gC gD基因并包裹PEG保护层的DNA疫苗,验证其在小鼠表达系统中可以成功表达,为后续对小鼠免疫效果的评价奠定了基础。 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学学报. 2020,32(04)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

质粒酶切鉴定结果

将处理好的小鼠胚胎细胞（NIH/3T3）置于免疫荧光显微镜下进行观察，可见到转染pCDNA4-g B-His、pCDNA4-gC-His、pCDNA4-gD-His的真核表达质粒的细胞有明显的绿光（图A-C），而转染了pCD-NA4-His的对照细胞无特异荧光（图D）。结果表明真核表达质粒可在小鼠胚胎细胞进行有效表达。图3 pCDNA4-gB/gC/gD-His真核表达质粒体外感染小鼠胚胎细胞间接免疫荧光检测基因表达（100×）

pCDNA4-gB/gC/gD-His真核表达质粒体外感染小鼠胚胎细胞间接免疫荧光检测基因表达（100×）

【参考文献】：
期刊论文
[1]新型聚维酮碘对牛传染性鼻气管炎病毒灭活效果试验[J]. 辛志浩,刘明明,刘行波,倪宏波.  黑龙江八一农垦大学学报. 2019(01)
[2]结构修饰的基于聚乙烯亚胺的载体在基因递送方面的研究进展[J]. 梁爽,韩雷强,张娜.  药物生物技术. 2017(04)
[3]牛红细胞抗菌肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性[J]. 张庆华,王青,尚田田,赵志雨,徐彦召,胡建和.  河南科技学院学报(自然科学版). 2014(02)
[4]牛传染性鼻气管炎病毒gE基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 孙志明,周伟光,陈玉惠,高晶,希尼尼根,关平原.  内蒙古农业大学学报(自然科学版). 2012(03)
[5]聚乙二醇化——药物输送的成功方法[J]. 蔡晶.  亚太传统医药. 2010(11)
[6]聚乙烯亚胺的修饰及其作为基因载体的研究[J]. 尹东锋,游庆霞,刘璟,曾平.  中国药房. 2009(34)
[7]延边黄牛的微卫星遗传变异及DNA指纹分析[J]. 金海国,曹阳,金允浩.  延边大学农学学报. 2007(04)
[8]用光生物素核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒[J]. 吴时友,封启民,蒋正军,孙书华,宫云浩,李昌琳,张瑞珍.  病毒学报. 1990(04)
[9]从新西兰进口奶牛中分离传染性牛鼻道气管炎病毒[J]. 周泰冲,叶章明,黎少权,钟耿,古清娇.  兽医科技杂志. 1981(01)

博士论文
[1]牛传染性鼻气管炎重组疫苗的基础研究[D]. 李继昌.东北农业大学 2002

硕士论文
[1]基于改性聚乙烯亚胺的siRNA递送系统的研究[D]. 金通.吉林大学 2017
[2]基于聚乙烯亚胺衍生物的功能化复合物的合成及其作为基因载体的性能研究[D]. 王铁艳.天津理工大学 2017
[3]PEI对G250 DNA疫苗的佐剂增强效应和prime-boost免疫策略研究[D]. 孙泽强.山东大学 2014



本文编号：3097564