大豆慢生型根瘤菌突变体库构建及参与环境胁迫相关基因的挖掘
发布时间：2021-03-27 04:00
豆科植物-根瘤菌共生固氮系统是生物固氮中效率最高的体系,无论对全球氮生态循环还是农业都极为重要。自然或农业生产条件下,豆科植物-根瘤菌共生固氮系统会不断遭受着逆境胁迫。长期以来,研究多集中在可控环境下的根瘤菌结瘤与固氮机制,以及豆科植物或者根瘤菌单方面对逆境的生理生化响应过程。作为具有紧密共生关系的根瘤菌是否以及如何帮助植物宿主抵抗不良环境仍然不清楚。深入理解大豆慢生型根瘤菌在大豆应答干旱胁迫伤害,适应性变化等过程中的生物学作用,对提高农业产量和保护生态环境具有非常重要的意义。本研究以大豆慢生型根菌Bradyrhizobium diazoefficiens USDA110为研究对象,采用Tn5转座诱变技术,建立突变体库,筛选胁迫环境条件型突变体,并初步探究了这些筛选突变菌株的生理生化、遗传以及共生特征。（1）探究了野生体B.d110在三种胁迫环境（pH、NaCl和干旱）条件下的生长模式,生长受到明显抑制（临界生长）时的胁迫条件分别是pH4.0、0.4%NaCl和12%PEG6000。以此为胁迫条件的大豆（绥农14号）接种实验结果显示,相较于非胁迫条件,无论接种与否,三种胁迫条件均显著降...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究所用mini-Tn5SSgusA20结构
兰州大学硕士学位论文 大豆慢生型根瘤菌突变体库构建及参与环境胁迫相关基因的挖掘1.2.2 Tn5 转座子的作用机制Tn5 转座子的转座是非复制型的，步骤复杂，它可以从遗传物质的一部分跳跃到另一部分，从而引起遗传变异。首先需要转座酶（tnp）结合到 Tn5 的 OE末端，tnp 才具有切割 DNA 的活性[30]。tnp 结合到 Tn5 后，对转座子 DNA 链的一端进行切割，然后在 tnp 的活化作用下，形成平末端的 Tn5，最后整体离开供体链，结合到靶 DNA，然后在 DNA 聚合酶的作用下补平供体链和受体 DNA 的缺口[31]（图 1.3）。
兰州大学硕士学位论文 大豆慢生型根瘤菌突变体库构与环境胁迫相关基因的挖于高温灭菌的 10ml 添加壮观霉素 Spcr100 的 LB 液体培养基，37℃，180r过夜培养（推迟 3 天培养）。2.接合阶段：（1）分别吸取第一步培养的两种菌 2-4ml，离心弃上清，灭菌水彻底（2）清洗抗生素三次，第三次用 500μl灭菌水悬浊。（3）分别取 300μl以上两种菌在 1.5ml 的离心管中混合，离心，弃去上清液，剩余液体悬浊菌体，此为混合菌液。（4）无菌滤膜放置在无抗的 HM 固体平板上，各吸取步骤（2）清洗体菌和受体菌 50ul 以及步骤（3）的混合菌液 50μl分别滴加在滤膜上各三（5）30℃培养至 3-4 天。
【参考文献】：
期刊论文
[1]近10年中国大陆主要粮食作物氮肥利用率分析[J]. 于飞,施卫明. 土壤学报. 2015(06)
[2]大豆生理生态干旱胁迫影响研究进展[J]. 崔维佳,常志云,李宁,张晓庆. 安徽农业科学. 2012(25)
[3]一株Zn抗性菌株的筛选鉴定及吸附条件优化[J]. 李慧芬,林雁冰,王娜娜,郭军康,韦革宏. 环境科学学报. 2010(11)
[4]豆科植物共生结瘤的分子基础和调控研究进展[J]. 丑敏霞,魏新元. 植物生态学报. 2010(07)
[5]Tn5转座突变技术在革兰氏阴性细菌分子遗传研究中的应用[J]. 年洪娟,陈丽梅,李昆志. 中国生物工程杂志. 2009(12)
[6]细菌生物膜的形成与调控机制[J]. 唐俊妮,史贤明,王红宁,周锐. 生物学杂志. 2009(02)
[7]农杆菌双组分信号转导系统中VirG蛋白结构与转化功能的分析[J]. 严礼,夏立秋,丁学知. 生命科学研究. 2008(04)
[8]我国南北大豆产区慢生大豆根瘤菌的遗传多样性和系统发育研究[J]. 张伟涛,杨江科,袁天英,周俊初. 微生物学报. 2006(01)
[9]转座子插入位点的鉴定方法[J]. 王瑞白,阚飙. 生物技术通讯. 2005(03)
[10]生态环境对根瘤菌竞争结瘤影响的研究进展[J]. 何庆元,胡艳,玉永雄. 大豆科学. 2004(01)
博士论文
[1]甘肃寒旱区苜蓿根瘤菌促生能力影响因子分析及高效促生菌株筛选研究[D]. 师尚礼.甘肃农业大学 2005
硕士论文
[1]水稻细菌性条斑病菌Tn5突变体的表型筛选与突变位点定位[D]. 卢香浓.广西大学 2013
[2]AMF对常见经济植物资源利用效率的促进作用研究[D]. 徐亚男.哈尔滨工业大学 2012
[3]应用基因芯片技术筛选野生大豆耐盐碱基因及功能研究[D]. 吴振敏.吉林农业大学 2008
[4]高效苜蓿根瘤菌株的筛选[D]. 钟文文.四川农业大学 2004
本文编号：3102843
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
本研究所用mini-Tn5SSgusA20结构
兰州大学硕士学位论文 大豆慢生型根瘤菌突变体库构建及参与环境胁迫相关基因的挖掘1.2.2 Tn5 转座子的作用机制Tn5 转座子的转座是非复制型的，步骤复杂，它可以从遗传物质的一部分跳跃到另一部分，从而引起遗传变异。首先需要转座酶（tnp）结合到 Tn5 的 OE末端，tnp 才具有切割 DNA 的活性[30]。tnp 结合到 Tn5 后，对转座子 DNA 链的一端进行切割，然后在 tnp 的活化作用下，形成平末端的 Tn5，最后整体离开供体链，结合到靶 DNA，然后在 DNA 聚合酶的作用下补平供体链和受体 DNA 的缺口[31]（图 1.3）。
兰州大学硕士学位论文 大豆慢生型根瘤菌突变体库构与环境胁迫相关基因的挖于高温灭菌的 10ml 添加壮观霉素 Spcr100 的 LB 液体培养基，37℃，180r过夜培养（推迟 3 天培养）。2.接合阶段：（1）分别吸取第一步培养的两种菌 2-4ml，离心弃上清，灭菌水彻底（2）清洗抗生素三次，第三次用 500μl灭菌水悬浊。（3）分别取 300μl以上两种菌在 1.5ml 的离心管中混合，离心，弃去上清液，剩余液体悬浊菌体，此为混合菌液。（4）无菌滤膜放置在无抗的 HM 固体平板上，各吸取步骤（2）清洗体菌和受体菌 50ul 以及步骤（3）的混合菌液 50μl分别滴加在滤膜上各三（5）30℃培养至 3-4 天。
【参考文献】：
期刊论文
[1]近10年中国大陆主要粮食作物氮肥利用率分析[J]. 于飞,施卫明. 土壤学报. 2015(06)
[2]大豆生理生态干旱胁迫影响研究进展[J]. 崔维佳,常志云,李宁,张晓庆. 安徽农业科学. 2012(25)
[3]一株Zn抗性菌株的筛选鉴定及吸附条件优化[J]. 李慧芬,林雁冰,王娜娜,郭军康,韦革宏. 环境科学学报. 2010(11)
[4]豆科植物共生结瘤的分子基础和调控研究进展[J]. 丑敏霞,魏新元. 植物生态学报. 2010(07)
[5]Tn5转座突变技术在革兰氏阴性细菌分子遗传研究中的应用[J]. 年洪娟,陈丽梅,李昆志. 中国生物工程杂志. 2009(12)
[6]细菌生物膜的形成与调控机制[J]. 唐俊妮,史贤明,王红宁,周锐. 生物学杂志. 2009(02)
[7]农杆菌双组分信号转导系统中VirG蛋白结构与转化功能的分析[J]. 严礼,夏立秋,丁学知. 生命科学研究. 2008(04)
[8]我国南北大豆产区慢生大豆根瘤菌的遗传多样性和系统发育研究[J]. 张伟涛,杨江科,袁天英,周俊初. 微生物学报. 2006(01)
[9]转座子插入位点的鉴定方法[J]. 王瑞白,阚飙. 生物技术通讯. 2005(03)
[10]生态环境对根瘤菌竞争结瘤影响的研究进展[J]. 何庆元,胡艳,玉永雄. 大豆科学. 2004(01)
博士论文
[1]甘肃寒旱区苜蓿根瘤菌促生能力影响因子分析及高效促生菌株筛选研究[D]. 师尚礼.甘肃农业大学 2005
硕士论文
[1]水稻细菌性条斑病菌Tn5突变体的表型筛选与突变位点定位[D]. 卢香浓.广西大学 2013
[2]AMF对常见经济植物资源利用效率的促进作用研究[D]. 徐亚男.哈尔滨工业大学 2012
[3]应用基因芯片技术筛选野生大豆耐盐碱基因及功能研究[D]. 吴振敏.吉林农业大学 2008
[4]高效苜蓿根瘤菌株的筛选[D]. 钟文文.四川农业大学 2004
本文编号：3102843
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3102843.html
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