拉布拉多犬及金毛寻回猎犬髋关节发育不良相关基因的SNP位点的检测

发布时间：2021-03-29 21:59

　　目的:以拉布拉多犬及金毛寻回猎犬为研究对象,检测已被报道的与髋关节发育不良具有显著关联性的8个基因上的15个SNP位点,验证其关联性,以期找到能够作为淘汰髋关节发育不良的拉布拉多犬及金毛寻回猎犬的遗传学标记。方法:1.影像学诊断,对实验犬（CHD犬25只,健康犬30只）的髋关节部位进行X光照射及影像学诊断,采用主观髋关节打分（OFA技术）与Norberg角衡量相结合的诊断方法评估犬的髋关节发育状况。2.血液样本的获取,征集CHD拉布拉多犬及金毛猎犬的信息,通过前肢静脉采血的方式获取血液样本。3.犬基因组DNA的提取,采用Blood Genome DNA Extraction Kit试剂盒提取。4.SNP位点DNA片段的获取及验证,查阅文献获取候选基因SNP位点,针对这些位点进行引物设计,完成PCR扩增、测序及SNP位点分型分析。结果:1.COL6A3基因CFA25:51040259位点与拉布拉多犬的CHD具有显著关联性（P=0.013）,CHD拉布拉多犬的A型等位基因频率显著偏高（P=0.006）。FN1基因CFA37:25095511位点与拉布拉多犬的CHD具有极显著关联性（P=0.... 

【文章来源】：大连医科大学辽宁省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CHD犬与健康犬的髋关节X光影像图

大连医科大学硕士学位论文PCR 循环：94℃ 1 min，60℃ 1 min，72℃ 1 min，循环 35 次；延伸 72℃取扩增产物 20 μl 与 6×Loading Buffer 以 5: 1 的比例均匀混合，在已的 1.5%的琼脂糖凝胶上电泳，电泳结束后，在成像仪上拍照。3.4.4. 测序及 SNP 位点分型将经过验证的 PCR 扩增片段委托宝生物（大连）生物技术有限公司通过测序数据的分析，确认候选基因 SNP 位点的基因型多态性分布。SN基因型多态性测序结果如图 2 所示。

大连医科大学硕士学位论文位点 rs3744539 与犬的 SNP 位点 rs851998705 间隔 196 个碱基，但两个 SNP上下游序列高度重合，rs3744539 位点为错义突变，突变碱基为 G—A/C，引基酸变化为 Asp Asn/His，rs851998705 位点同为错义突变，突变碱基为 G—引起氨基酸变化为 Arg His。因而选择 rs851998705 为候选基因位点进行检析。

【参考文献】：
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本文编号：3108271