VIGS诱导PSY、CYCB基因沉默对枇杷果实类胡萝卜素积累的影响
发布时间：2021-04-08 03:36
本研究以‘大五星’（红肉）和“川农1-5-9”（白肉）枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）不同发育阶段枇杷果实果皮、果肉为材料,采用同源克隆法获得类胡萝卜素积累过程中关键酶基因——PSY和CYCB,并将获得的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,再利用qRT-PCR从转录水平上检测两种枇杷不同发育阶段基因表达水平。本研究还利用VIGS技术分别干扰‘早钟6号’枇杷果实中PSY、CYCB基因的表达,并分析沉默后类胡萝卜素代谢途径中相关基因的表达情况,探究PSY、CYCB基因在枇杷果实类胡萝卜素积累过程中的调控作用。研究结果如下:1、同源克隆获得了PSY、CYCB基因cDNA序列全长,分别具有一个1 191 bp和1 491 bp的完整的开放阅读框,推导出氨基酸396和496个。不同品种（系）间的PSY、CYCB序列比对发现,序列间具有很高的相似性,都仅有1个氨基酸的差异。氨基酸同源性分析表明,枇杷PSY、CYCB蛋白分别与其他物种具有很高的相似性,可能具有相似的生理特征和形态特征。2、qRT-PCR分析表明,随着枇杷果实的发育,PSY、CYCB基因表达量明...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
前体GGPP合成Fig.1ThesynthesisofprecursorGGPPIDIIPPDMAPPGGPPSGGPP
利用改造的烟草花叶病毒（TMV）载体将本氏烟 PDS 基因沉默[17]。而后基于 TMV载体已开发出多种 VIGS 载体，除 PVX[104]、TGMV[105]等较早开发的载体外，近年来针对不同宿主陆续开发了多种载体。RNA病毒载体应用最为广泛，常用的主要有TMVPVX 和 TRV 等。早期开发的 TMV、PVX 和 TGMV 载体引起寄主植物表型叠加，且不能侵染生长点。TRV 载体克服了 TMV、PVX、TGMV 载体的缺点，具有能够侵染分生组织，寄主范围广，沉默效率高，持续时间长，对寄主伤害小且沉默表型明显等优点[11, 13, 18]。TRV 载体为双分体单链正义 RNA（图 3），RNA1（pTRV1）和 RNA2（pTRV2）cDNA克隆都从载体两个花椰菜 35S 启动子（2×CaMV 35S）到 NOS 终止子，LB 和 RB 为载体的左边界和右边界，Rz 为 pTRV1 和 pTRV2 共享的自切割核酶。pTRV1 还包含RNA 依赖的 RNA 聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）、移动蛋白（movement protein，MP）和一个 16 kDa 富集半胱氨酸的蛋白[13]。pTRV2 还包含外壳蛋白（coat protein，CP）和一个多克隆位点（multiple cloning site，MCS）[13]。
14图 6 离体枇杷材料示意图Fig. 6 In-vitro loquat fruit at breaker stage和BamH I核酸内切酶、T4连接酶、Rax DNA Polymerase）、RR047A型2×TaqPCRMasterMix、B518191型质卡那霉素（Kan）、利福平（Rif）、庆各种培养试剂于上海生工购置。DP天根购置。和 GV3101）于北京博迈德购置。p
【参考文献】：
期刊论文
[1]枇杷果实类胡萝卜素研究进展[J]. 刘小洪,孙海艳,陈薇薇,郭启高,李晓林,梁国鲁. 果树学报. 2016(07)
[2]基因沉默技术及其在棉花中的应用[J]. 李婷,孔祥强,董合忠. 分子植物育种. 2016(04)
[3]VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响[J]. 温小红,姜永华,周轲,任小林. 西北农业学报. 2015(11)
[4]园艺植物中类胡萝卜素合成与调控的研究进展[J]. 高慧君,明家琪,张雅娟,徐娟. 园艺学报. 2015(09)
[5]查尔酮合酶基因对桃果实花色苷代谢的影响[J]. 张蕾,朱立新,徐川,崔春梅,盛宏亚,李瑞,王红清. 园艺学报. 2015(01)
[6]病毒诱导的基因沉默（VIGS）研究进展[J]. 宋震,李中安,周常勇. 园艺学报. 2014(09)
[7]SEPALLATA（SEP）1/2-like转录因子MdMADS9在早生富士苹果果实β-胡萝卜素合成中的作用[J]. 何晓文,王永章,刘成连,原永兵. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2013(04)
[8]不同颜色光对野菊花色素溶液稳定性及类胡萝卜素含量的影响[J]. 申海进,郭巧生,李育川,房海灵. 植物资源与环境学报. 2013(04)
[9]枇杷DXR基因的克隆及其在果实成熟过程中的表达分析[J]. 张玲,林顺权,胡又厘,郑婷婷,杨向晖. 果树学报. 2013(04)
[10]植物激素——脱落酸（ABA）的细胞信号转导机制[J]. 周杨杨,左圆圆,李小平. 黑龙江农业科学. 2011(07)
博士论文
[1]面粉颜色相关性状分子基础及关键基因Psy1功能研究[D]. 翟胜男.中国农业大学 2016
[2]红肉和白肉枇杷果实类胡萝卜素差异积累机制研究[D]. 傅秀敏.浙江大学 2013
硕士论文
[1]正向遗传学研究中的候选基因识别[D]. 王纬韬.浙江大学 2017
[2]欧李果实花色苷生物合成相关结构基因克隆与表达分析[D]. 杨淑一.山西农业大学 2015
[3]利用VIGS技术对草莓FaMYB5基因功能的研究[D]. 王玲.四川农业大学 2015
[4]胡萝卜PSY基因的功能研究[D]. 王慧.中国农业科学院 2014
[5]红肉脐橙和普通脐橙果实类胡萝卜素合成基因的差异表达[D]. 金蓉.浙江大学 2007
本文编号：3124773
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
前体GGPP合成Fig.1ThesynthesisofprecursorGGPPIDIIPPDMAPPGGPPSGGPP
利用改造的烟草花叶病毒（TMV）载体将本氏烟 PDS 基因沉默[17]。而后基于 TMV载体已开发出多种 VIGS 载体，除 PVX[104]、TGMV[105]等较早开发的载体外，近年来针对不同宿主陆续开发了多种载体。RNA病毒载体应用最为广泛，常用的主要有TMVPVX 和 TRV 等。早期开发的 TMV、PVX 和 TGMV 载体引起寄主植物表型叠加，且不能侵染生长点。TRV 载体克服了 TMV、PVX、TGMV 载体的缺点，具有能够侵染分生组织，寄主范围广，沉默效率高，持续时间长，对寄主伤害小且沉默表型明显等优点[11, 13, 18]。TRV 载体为双分体单链正义 RNA（图 3），RNA1（pTRV1）和 RNA2（pTRV2）cDNA克隆都从载体两个花椰菜 35S 启动子（2×CaMV 35S）到 NOS 终止子，LB 和 RB 为载体的左边界和右边界，Rz 为 pTRV1 和 pTRV2 共享的自切割核酶。pTRV1 还包含RNA 依赖的 RNA 聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）、移动蛋白（movement protein，MP）和一个 16 kDa 富集半胱氨酸的蛋白[13]。pTRV2 还包含外壳蛋白（coat protein，CP）和一个多克隆位点（multiple cloning site，MCS）[13]。
14图 6 离体枇杷材料示意图Fig. 6 In-vitro loquat fruit at breaker stage和BamH I核酸内切酶、T4连接酶、Rax DNA Polymerase）、RR047A型2×TaqPCRMasterMix、B518191型质卡那霉素（Kan）、利福平（Rif）、庆各种培养试剂于上海生工购置。DP天根购置。和 GV3101）于北京博迈德购置。p
【参考文献】：
期刊论文
[1]枇杷果实类胡萝卜素研究进展[J]. 刘小洪,孙海艳,陈薇薇,郭启高,李晓林,梁国鲁. 果树学报. 2016(07)
[2]基因沉默技术及其在棉花中的应用[J]. 李婷,孔祥强,董合忠. 分子植物育种. 2016(04)
[3]VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响[J]. 温小红,姜永华,周轲,任小林. 西北农业学报. 2015(11)
[4]园艺植物中类胡萝卜素合成与调控的研究进展[J]. 高慧君,明家琪,张雅娟,徐娟. 园艺学报. 2015(09)
[5]查尔酮合酶基因对桃果实花色苷代谢的影响[J]. 张蕾,朱立新,徐川,崔春梅,盛宏亚,李瑞,王红清. 园艺学报. 2015(01)
[6]病毒诱导的基因沉默（VIGS）研究进展[J]. 宋震,李中安,周常勇. 园艺学报. 2014(09)
[7]SEPALLATA（SEP）1/2-like转录因子MdMADS9在早生富士苹果果实β-胡萝卜素合成中的作用[J]. 何晓文,王永章,刘成连,原永兵. 青岛农业大学学报(自然科学版). 2013(04)
[8]不同颜色光对野菊花色素溶液稳定性及类胡萝卜素含量的影响[J]. 申海进,郭巧生,李育川,房海灵. 植物资源与环境学报. 2013(04)
[9]枇杷DXR基因的克隆及其在果实成熟过程中的表达分析[J]. 张玲,林顺权,胡又厘,郑婷婷,杨向晖. 果树学报. 2013(04)
[10]植物激素——脱落酸（ABA）的细胞信号转导机制[J]. 周杨杨,左圆圆,李小平. 黑龙江农业科学. 2011(07)
博士论文
[1]面粉颜色相关性状分子基础及关键基因Psy1功能研究[D]. 翟胜男.中国农业大学 2016
[2]红肉和白肉枇杷果实类胡萝卜素差异积累机制研究[D]. 傅秀敏.浙江大学 2013
硕士论文
[1]正向遗传学研究中的候选基因识别[D]. 王纬韬.浙江大学 2017
[2]欧李果实花色苷生物合成相关结构基因克隆与表达分析[D]. 杨淑一.山西农业大学 2015
[3]利用VIGS技术对草莓FaMYB5基因功能的研究[D]. 王玲.四川农业大学 2015
[4]胡萝卜PSY基因的功能研究[D]. 王慧.中国农业科学院 2014
[5]红肉脐橙和普通脐橙果实类胡萝卜素合成基因的差异表达[D]. 金蓉.浙江大学 2007
本文编号：3124773
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3124773.html
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