禾谷镰刀菌Rabring7基因的功能研究

发布时间：2021-04-16 14:21

　　小麦赤霉病是在全球范围内普遍存在的一种病害,它能够引起小麦减产和品质下降。引起小麦赤霉病的主要病原菌是禾谷镰刀菌,其产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对人畜的健康有巨大的威胁。DON毒素的合成受物理、化学和生物大分子等因素的影响。Rab7对DON毒素合成有影响,Rab7的功能执行需要上游调节因子和下游效应因子的作用。在哺乳动物中,Rabring7是Rab7的效应因子,但Rabring7在禾谷镰刀菌中的功能未知。本研究分析了Rabring7与FgRab7的相互作用,明确了禾谷镰刀菌Rabring7的功能,主要研究结果如下:通过同源比对,在禾谷镰刀菌数据库中我们找到2个与Rabring7同源的基因:FGSG-00316和FGSG-01047。生物信息学分析显示,FGSG-00316蛋白含有RING-H2结构域,亚细胞定位在质膜中;FGSG-01047蛋白含有RING U-box结构域,亚细胞定位在细胞核中。首先,我们利用酵母双杂交技术研究了Rabring7与FgRab7的相互作用情况,结果显示,FGSG-00316、FGSG-01047与FgRab7原始态、激活态Rab7-CA和Rab7-... 

【文章来源】：河南工业大学河南省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pGADT7载体图谱

95℃ 45s8 循环 退火温度 2min72℃ 延伸时间95℃ 45s25 循环 退火温度 45s72℃ 延伸时间72℃ 10min）将 pGBKT7 质粒（如图 2 为 pGBKT7 的载体图谱）和目的片段用 Nd酶同时进行双酶切，在 37℃水浴锅中酶切 4h 后将酶切后的质粒和目的片）连接、转化、验证的操作同融合载体一样，验证正确后测序，保存测可。

00316OEF CCCAATCTTCAAACTCGAGATGAAATCCTCAACGATACCT 53℃00316COR GCCCTTGCTCACCATAAGCTTGATCGTCAGGAGATGACC 51℃01047OEF AACCCAATCTTCAAACTCGAGATGCTGCCTGGGTCAGTAT 53℃01047COR GCCCTTGCTCACCATAAGCTTGATATTGTCGCTAATTCCGCT 55℃P-Hind3-F CCCAAGCTTATGGTGAGCAAGGGCGAG 59℃P-BamHI-R CGGGATCCTTACTTGTACAGCTCGTCCA 59℃27-KpnI-F CGGGGTACCGCCAGGGTTTTCCCAGTCA 55℃27-XhoI-R CCGCTCGAGTTTGAAGATTGGGTTCCTACG 55℃性化克隆载体的制备：过表达载体 PKNT-RP27-GFP 图谱如图 3 所示。用 制性内切酶酶切使环状载体线性化。酶切体系由 HindIII 1μL、XhoI 1μL-RP27-GFP 质粒 1μg、10×NE Buffer（CutSmart）5μL，加无菌水补足至 50μ切 4 小时，纯化。


本文编号：3141596