利用CRISPR-Cas9技术构建RBM24基因敲除小鼠胚胎干细胞系

发布时间：2021-04-19 05:45

　　本研究基于RBM24基因调控干细胞向心肌细胞分化。利用CRISPR技术平台,对小鼠基因组上的RBM24基因的1号外显子进行特异性敲除,构建了 RBM24高效特异性敲除的干细胞系,结合相关生物信息学分析,对RBM24在心脏发生发育中的相关作用进行探究。本研究以RBM24基因为靶点,联合CRISPR/Cas9技术与小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的方法,建立研究基因缺陷型胚胎干细胞的模型与心肌细胞发育分化的相关分子机制的方法。主要目的包括:a.构建双gRNA引导的CRIPSR-Cas9载体,并对其可行性以及检测方法进行评定;b.采用CRIPSR-Cas9基因编辑技术,构建与心脏发育相关的RBM24基因敲除小鼠胚胎干细胞（mESC）稳定细胞系;c.探究经过电穿孔转染与流式细胞仪分选后的RBM24基因敲除mESC系的细胞多能性是否受影响;d.探讨RBM24基因敲除对mESC的拟胚体（EB）向心肌细胞分化的能力的影响。e.结合生物信息学,探讨RBM24敲除后心脏相关基因发生的变化。在本文中,通过分子克隆技术构建针对敲除RBM24基因的1号外显子的pX458M（pX459M）载体,并将 pX458M（... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１心脏发育的基因调控示意图??Ｆｉｇｕｒｅ．?１?Ａ?ｇｅｎｅｔｉｃ?ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ?ｆｏｒ?ｈｅａｒｔ?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．??２??

第一章前言??ＡＳ）产生多种ｍＲＮＡ。ＲＮＡ结合蛋白在这一过程中发挥重要的性蛋白Ｎｏｖａ包含三个ＫＨ域，可以通过识别内含子ＹＣＡＹ（Ｙ表嘧啶Ｕ）序列控制一些ｍＲＮＡ?（如：ＪＮＫ２，ｎｅｏｇｅｎｉｎ等）的可变主要参与调节维持神经元的可塑性。在自身免疫性副神经疾病（Ｎｏｖａ蛋白在神经系统中减少，会出现过度运动的神经系统症状。??ａ?ｌ二。一！■（＿＇??

第一章前言??１．３．２．１?ＲＢＭ２４基因的结构??ＲＢＭ２４也被称为Ｓｅｂ－４、ＲＮＰＣ－６，位于小鼠第１３号染色体上，ＲＢＭ２４含??有４个外显子，其编码的蛋白含有２３６个氨基酸，大小为２４．７ｋＤ，ＮＣＢＩ最新??编号为＞＾＿００００７９．６（４６４１８１７６．．４６４３１０９９）。１１８１＾２４蛋白在小鼠和人中的同源性??高达９７．８％，在非洲爪蟾和斑马鱼中也分别达到了?８９％以及８３％１１。我们通过蛋??白的序列比对聚类分析得知，在大部分物种中ＲＢＭ２４的ＲＲＭ结构域相对较为??保守，不同物种之间表达的ＲＢＭ２４蛋白具有很高的同源性。在ＥＮＣＯＤＥ计划??中对成年小鼠的不同器官的ＲＢＭ２４表达谱进行了定量，在心脏组织中ＲＢＭ２４??的表达量最高，如图。??


本文编号：3146955