细粒棘球绦虫六钩蚴M26基因的克

发布时间：2021-04-22 20:19

　　细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus）主要寄生于犬、狼、狐狸等犬科动物终末宿主体内,其虫卵和孕节随粪便排出体外,污染草料和饮水,牛、羊以及人等中间宿主吞食虫卵后感染此病,进入消化道的六钩蚴钻入肠壁经血流或淋巴散布到体内各处,主要在肝和肺脏引起病变导致生长缓慢,严重危害人的健康和畜牧业的快速发展,给世界经济造成严重损失。因此,防治此病在人类健康和畜牧业发展方面非常重要。长期以来,各国研究者都在探索快速诊断此病的方法,但是并未在早期诊断方面取得突破性成果。绵羊是该寄生虫的中间宿主,若在绵羊感染早期,即在六钩蚴进入血液,早期分泌蛋白时诊断出此病,并采取有效治疗措施,将对控制此病流行具有重要意义。目前,包虫病的诊断方式主要通过影像检测（X线射片,CT,超声,MR,DSA/SCA）,皮内试验及血象检测等。但这些方法多为后期诊断（即形成包囊后）。而本试验的方法是采用六钩蚴分泌蛋白为抗原通过ELISA法对包虫病进行早期诊断,目前针对包虫病早期诊断的相关研究国内外尚未有过报道。因此选择特异性高的抗原,建立敏感性高以及特异性强的早期诊断方法十分必要。本研究为了探索在感染早期能够检... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文献综述
    第一章 棘球蚴病的研究进展
        1 病原学形态
        2 生活史
        3 种类及基因型
        4 流行病学
            4.1 中间宿主流行病学研究进展
            4.2 终末宿主-家畜包虫病流行病学研究进展
        5 致病作用
        6 诊断CE
            6.1 血清测定
            6.2 成像
            6.3 放射学
            6.4 超声波
            6.5 MRI
        7 治疗
            7.1 化学药物治疗
            7.2 外科手术管理
        8 防治
    第二章 副肌球蛋白在寄生虫病诊断方面的研究进展
        1 副肌球蛋白的分布与特征
        2 副肌球蛋白的分子生物学特征
        3 副肌球蛋白疫苗研究
            3.1 天然蛋白疫苗
            3.2 重组蛋白疫苗
            3.3 核酸疫苗
        4 本试验的目的意义
第二篇 试验内容
    第一章 细粒棘球绦虫六钩蚴M26基因的克隆及原核表达
        1 材料
            1.1 试验材料
            1.2 主要仪器
            1.3 主要试剂
            1.4 溶液配制
        2 方法
            2.1 构建M26克隆载体
            2.2 构建M26表达载体
            2.3 pET-30a-M26重组蛋白SDS-PAGE分析小量表达
            2.4 pET-30a-M26重组蛋白SDS-PAGE分析大量表达
            2.5 蛋白质纯化
        3 结果
            3.1 M26序列合成结果
            3.2 pMD19-T-M26克隆载体测序结果
            3.3 pET-30a-M26表达载体双酶切鉴定
            3.4 pET-30a-M26重组蛋白SDS-PAGE分析小量表达
            3.5 pET-30a-M26重组蛋白SDS-PAGE分析大量表达
            3.6 pET-30a-M26重组蛋白的纯化
        4 讨论
        5 小结
    第二章 M26多克隆抗体的制备
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验试剂
            1.3 相关试剂的配置
        2 方法
            2.1 兔阴性血清的制备
            2.2 M26免疫新西兰大白兔
            2.3 M26多抗血清效价检测
            2.4 Western blot验证
            2.5 M26多克隆抗体的纯化
            2.6 人工模型的建立
            2.7 多克隆抗体检测各个时间点血清中副肌球蛋白
        3 结果
            3.1 M26多抗血清效价的测定
            3.2 重组蛋白M26制备的多抗血清Western blot验证
            3.3 M26多隆抗体的纯化
            3.4 M26多克隆抗体效价的测定
            3.5 人工模型的建立
            3.6 多克隆抗体检测各个时间点血清中副肌球蛋白
        4 讨论
        5 小结
    第三章 M26阳性杂交瘤细胞的筛选
        1 材料
            1.1 试验材料
            1.2 试验仪器与耗材
            1.3 试验试剂
            1.4 相关试剂的配置
        2 方法
            2.1 动物免疫
            2.2 骨髓瘤细胞的饲养
            2.3 免疫后小鼠脾细胞的制备
            2.4 细胞融合
            2.5 阳性杂交瘤细胞的第一次筛选
            2.6 阳性杂交瘤细胞的第二次筛选
            2.7 阳性杂交瘤细胞的亚类鉴定
            2.8 阳性杂交瘤细胞检测各个时间点血清中副肌球蛋白
        3 结果
            3.1 小鼠免疫后的抗体水平测定
            3.2 阳性杂交瘤细胞的第一次筛选
            3.3 阳性杂交瘤细胞的第二次筛选
            3.4 阳性杂交瘤细胞亚型分析
            3.5 阳性杂交瘤细胞检测各个时间点血清中副肌球蛋白
        4 讨论
        5 小结
全文结论
创新点
参考文献
致谢
作者简介
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
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[5]新疆裕民县家畜包虫病感染情况调查[J]. 闫京阳.  中国畜牧兽医文摘. 2016(04)
[6]2005—2014年新疆生产建设兵团包虫病患病情况分析[J]. 张慧霞,张海亭,伊斯拉音·乌斯曼.  中国卫生产业. 2016(01)
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[10]新疆巴音布鲁克奎克乌苏达板地区2014年绵羊肝囊型包虫病现患率调查[J]. 董建,杨凌菲,张文宝,李海涛,姜涛,齐新伟,宋涛.  中华流行病学杂志. 2015 (02)

硕士论文
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[3]抗山羊传染性胸膜肺炎支原体PG3单克隆抗体的制备及研究[D]. 李少松.西南大学 2007



本文编号：3154407