腺病毒介导人凝血因子IX基因在小鼠脂肪干细胞中的表达

发布时间：2021-04-23 05:46

　　目的:探讨腺病毒介导的人凝血因子IX（hFIX）基因在小鼠脂肪干细胞（adipose-derived stem cell,ADSC）中的表达。方法:体外分离培养小鼠脂肪干细胞,观察其细胞形态,CCK-8法测定其生长活力,流式细胞术鉴定其细胞表型CD29、CD90、CD45,成脂成骨诱导鉴定其分化能力。将携带hIX基因的腺病毒转染小鼠脂肪干细胞,对比观察其与未转染时细胞形态及生长曲线有无变化。RT-PCR检测hFIX基因在细胞中的表达,Western blot检测细胞内及培养细胞上清液中hFIX蛋白的表达。ELISA法检测细胞上清液中的hFIX蛋白量（The antigen content of hFIX,FIX:Ag）,一期法检测培养细胞上清液中hFIX蛋白活性（The clotting factor activity of hFIX,FIX:C）。结果:小鼠ADSC离体培养最初几小时呈体积较小的圆球形,具有很强的折光性,贴壁生长时间为种瓶后4-6 h,种瓶后72 h细胞变为长梭形纤维状,呈漩涡状排列;第3代ADSC体外培养1-2 d生长速度较缓慢,3-5 d增殖速度增快,呈指数倍扩增... 

【文章来源】：中国实验血液学杂志. 2020,28(05)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
材料和方法
    试剂与仪器
    ADSC的分离培养
    ADSC生长曲线的CCK-8法检测
    成脂诱导分化
    成骨诱导分化
    ADSC表型的流式细胞术鉴定
    携带hF IX基因的腺病毒转染ADSC
    细胞内hF IX蛋白表达的Western blot检测
    细胞上清hF IX蛋白表达的Western blot检测
    细胞上清FIX:Ag的ELISA法测定
    细胞上清FIX:C的一期法测定
    统计学分析
结果
    细胞的生长及形态学特点
    ADSC生长曲线
    成脂诱导结果
    成骨诱导结果
    ADSC细胞表型流式细胞仪的检测结果
    携带hF IX腺病毒转染ADSC
    细胞中hF IX mRNA的表达
    细胞上清中hF IX蛋白的表达
    细胞上清液中FIX:Ag的分泌情况
    细胞上清液中FIX:C的分泌情况
讨论



本文编号：3154751