HSL基因对鲤脂肪沉积的影响及其调控机制初探

发布时间：2021-04-25 09:32

　　脂肪含量是评价鱼类品质的重要指标之一。适宜的肌内脂含量可以提高肌肉嫩度和多汁性,有利于改善肉质和口感,而腹腔脂肪的大量沉积不仅会造成鱼体代谢紊乱、免疫力和应激耐受力下降,而且会导致鱼类生长性能下降,饲料利用率降低,从而降低养殖效率。因此,了解脂肪沉积分子机制可为鱼类肉质改良改善、生产效率提高提供理论依据,具有较大的实际意义。脂肪沉积是一个复杂的生理和生化过程,由代谢酶调节,受到脂肪摄取、合成和分解等信号通路中相关基因的调控。正确了解脂肪代谢中的关键基因及信号通路在脂肪沉积过程中的作用机制是我们进行脂肪沉积调控,进而改善肉类品质的基础。激素敏感脂肪酶（hormone-sensitive lipase,HSL or LIPE）是脂肪动员的关键酶和限速酶,它能够将甘油三酯分解成游离脂肪酸,对细胞内调节甘油三酯含量起重要作用,是影响动物脂肪沉积的关键酶之一。本研究以鲤为研究对象,从HSL基因入手,探究其时空表达特征及其与脂肪沉积的关系,探讨其对鲤脂肪沉积的影响,进一步采用基因敲除技术研究HSL基因对脂肪代谢的影响,探讨其可能的生物学功能及在脂肪代谢调控通路中的作用机制,旨在为深入研究鲤脂肪沉积... 

【文章来源】：上海海洋大学上海市

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 鱼类脂肪性状相关功能基因研究进展
        1.1.1 激素敏感性脂肪酶基因
        1.1.2 脂肪酸合成酶基因
        1.1.3 乙酰辅酶A羧化酶基因
        1.1.4 脂蛋白脂酶基因
        1.1.5 脂肪甘油三酯脂肪酶基因
    1.2 CRISPR-Cas9 系统及其应用
        1.2.1 CRISPR-Cas9 的结构及作用机制
        1.2.2 CRISPR-Cas9 的分类
        1.2.3 CRISPR-Cas9 的应用
    1.3 研究目的及意义
第二章 鲤HSL基因时空表达特征及与脂肪沉积相关性研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 主要仪器与试剂
        2.1.2 样品采集
        2.1.3 总RNA提取
        2.1.4 cDNA第一链的合成
        2.1.5 反转录与HSL基因核心片段的构建
        2.1.6 HSL基因全长c DNA序列的获得
        2.1.7 生物信息学和统计分析
        2.1.8 基因表达规律分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 鲤HSL基因全长c DNA序列及分析
        2.2.2 氨基酸序列多重比对
        2.2.3 系统发育分析
        2.2.4 HSL基因的组织分布
        2.2.5 HSL基因在早期发育阶段的表达情况
        2.2.6 HSL基因表达与脂肪沉积的相关性研究
    2.3 讨论
    2.4 本章小结
第三章 HSL基因敲除对脂肪沉积的影响及机制初探
    3.1 材料与方法
        3.1.1 主要仪器与试剂
        3.1.2 实验鱼
        3.1.3 基因敲除靶位点设计
        3.1.4 gRNA制备
        3.1.5 受精卵显微注射
        3.1.6 突变效率检测
        3.1.7 HSL2基因突变纯系的构建
        3.1.8 HSL2基因突变个体表型鉴定
        3.1.9 脂肪代谢相关基因表达水平检测
    3.2 结果与分析
        3.2.1 基因敲除靶位点选择及gRNA制备
        3.2.2 基因敲除效率
        3.2.3 HSL2基因突变体的获得
        3.2.4 突变位点序列及编码氨基酸分析
        3.2.5 HSL2基因突变对斑马鱼表型的影响
        3.2.6 HSL2基因突变对脂代谢相关基因的影响
    3.3 讨论
    3.4 本章小结
总结
参考文献
硕士期间研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]持续热应激对生长猪生长性能和脂质代谢相关激素、酶及产物的影响[J]. 张闯,辛海瑞,郝月,顾宪红.  动物营养学报. 2019(06)
[2]紫苏籽提取物对育肥牛肌内脂肪沉积的影响[J]. 张海波.  动物营养学报. 2019(04)
[3]饥饿胁迫对大黄鱼激素敏感性脂肪酶和乙酰辅酶A羧化酶mRNA表达及酶活性的影响[J]. 钱宝英,黄红丽,李娟,曹明月,张玉,赵亚运,薛良义.  海洋学报. 2018(12)
[4]斑马鱼——理想的现代药学研究模式生物[J]. 毛雯.  南昌师范学院学报. 2018(06)
[5]外源性脂肪酸对罗非鱼脂肪细胞增殖与分化的影响[J]. 王雅文,乔芳,张美玲,贾永义,杜震宇.  水生生物学报. 2018(03)
[6]草鱼乙酰辅酶A羧化酶β基因全长cDNA分子克隆与表达分析[J]. 严媛,程汉良,许建和,韩振,易乐飞,申欣,丁祝进.  动物营养学报. 2018(05)
[7]梭鱼脂肪酸合成酶基因部分片段的克隆和表达分析[J]. 杨文平,王爱民,於叶兵,刘飞,吕林兰,吕富.  江苏农业科学. 2017(23)
[8]鲤脂肪酸合成酶基因的克隆与表达分析[J]. 孙志鹏,吕伟华,匡友谊,曹顶臣,佟广香,孙效文,郑先虎.  水产学杂志. 2017(04)
[9]细菌CRISPR-Cas系统的研究进展[J]. 胡丽,陈实.  微生物学报. 2017(11)
[10]斑马鱼营养性脂肪肝模型构建[J]. 李钰,何夙旭,张震,徐俐,丁倩雯,郭小泽,易敢峰,徐树德,马徐发,周志刚.  水产学报. 2017(05)

博士论文
[1]鲤鱼肌肉脂肪性状相关基因筛选及功能研究[D]. 吕伟华.东北农业大学 2017

硕士论文
[1]大黄鱼部分脂肪代谢相关基因的克隆及其表达分析[D]. 周旋.集美大学 2009



本文编号：3159151