尼罗罗非鱼Ly75基因的克

发布时间：2021-05-12 12:50

　　[目的]获得尼罗罗非鱼淋巴细胞抗原75（OnLy75）基因的cDNA序列和多克隆抗体。[方法]采用RACE技术克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通过DNAMAN、MEGA等软件分析其序列特征;构建OnLy75的原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核诱导表达;将纯化后的OnLy75重组蛋白免疫新西兰大耳白兔,并通过Western Blot技术检测多克隆抗体的效果。[结果]OnLy75的cDNA序列全长为6 632 bp,开放阅读框5 199 bp,编码1 732个氨基酸。其OnLy75重组蛋白主要存在于包涵体中;将重组蛋白纯化后免疫新西兰大耳白兔,成功获得了兔抗OnLy75多克隆抗体。用该多抗对尼罗罗非鱼不同器官进行Western Blot内源性检测,结果显示该蛋白在精巢中有丰富的表达。[结论]兔抗OnLy75多克隆抗体的成功制备,为进一步深入研究OnLy75在尼罗罗非鱼组织中的定位及功能研究提供了工具。 

【文章来源】：生物技术. 2017,27(03)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 实验试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 RNA的提取和c DNA的制备
        1.2.2 On Ly75基因部分c DNA序列的获得
        1.2.3 On Ly75序列分析和同源性比较
        1.2.4 On Ly75原核表达质粒的构建和重组蛋白的诱导表达、条件优化及纯化
        1.2.5 多克隆抗体的制备和Western Blot检测抗体特异性
2 结果与分析
    2.1 On Ly75 c DNA的克隆和序列分析
    2.2 同源比较和系统进化分析
    2.3 原核表达
    2.4 重组蛋白表达条件优化
    2.5 多克隆抗体制备
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]尼罗罗非鱼补体C9基因的克隆和组织表达分析[J]. 胡欣欣,曹建萌,卢迈新,陈琼,陈昆平.  淡水渔业. 2017(01)
[2]世界罗非鱼生产和贸易现状分析[J]. 张红燕,袁永明,贺艳辉,王红卫,代云云.  农业展望. 2016(05)
[3]罗非鱼无乳链球菌LrrG蛋白的原核表达及免疫原性分析[J]. 陈雪,可小丽,卢迈新,刘志刚,高风英,朱华平,曹建萌.  水产学报. 2014(05)
[4]CD205的结构与功能研究[J]. 卢晓,陈政良.  国外医学(分子生物学分册). 2002(05)

博士论文
[1]罗非鱼基因敲除技术的建立及其在性别决定与分化研究中的应用[D]. 李明辉.西南大学 2014
[2]罗非鱼无乳链球菌病病原学、病理学及cpsE基因的原核表达研究[D]. 黄锦炉.四川农业大学 2012

硕士论文
[1]罗非鱼补体C3的克隆及无乳链球菌C5a肽酶免疫前后的组织表达分析[D]. 李晓恬.上海海洋大学 2016
[2]无乳链球菌cpsE基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备及其在原位PCR中的应用[D]. 付希.四川农业大学 2012
[3]重组FHL2的原核表达、纯化及抗血清的制备[D]. 张弟.南方医科大学 2008



本文编号：3183449