菠萝AcFTL1和AcFTL2基因的克隆及功能鉴定

发布时间：2021-05-22 16:46

　　菠萝是世界上三大热带草本果树之一,由于其独特的风味儿和营养价值深受消费者青睐,因而具有较高的商业价值。近年来,我国菠萝产业在国内外市场中并不具备竞争优势。开花是植物从营养生长过度到生殖生长的转折阶段,对植物果实的形成、果实的产量和品质具有长远的影响。乙烯诱导菠萝开花是一种常规的栽培技术,但其分子机制的研究尚处于初始阶段。FT是植物中可将多种途径的开花诱导信号进行整合并传递给下游的花分生组织决定基因的重要调节因子,因而具有重要的研究价值。菠萝AcFT基因（NCBI注册号:HQ343233.1）的表达受乙烯调控,并且能够促进拟南芥开花时间提前大约6.8天并增加花絮的数量。本研究首先从“MD-2”菠萝中克隆了两个新的FT同源基因AcFTL1和AcFTL2,并利用实时荧光定量PCR技术检测了AcFTL1和AcFTL2基因与对照基因（AcFT）分别对低浓度（600ppm）和高浓度（1200 ppm）乙烯利的响应特性,然后通过生物信息学的方法分析了AcFTL1和AcFTL2蛋白的理化性质、保守结构域、亲缘关系和信号肽等。进一步构建了35S::AcFTL1、35S::AcFTL2过表达载体,并利用农... 

【文章来源】：长江大学湖北省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 引言
    1.2 植物开花的分子机制
        1.2.1 植物开花诱导途径
        1.2.2 开花信号整合因子
        1.2.3 花分生组织决定基因
        1.2.4 “ABCDE”模型
    1.3 乙烯及其信号传导机制
    1.4 菠萝开花分子机制的研究进展
    1.5 研究目的及意义
第2章 AcFTL1和AcFTL2基因的表达量检测与克隆分析
    2.1 引言
    2.2 试验材料与试剂
        2.2.1 试验材料
        2.2.2 材料处理
        2.2.3 酶
        2.2.4 试剂盒
        2.2.5 母液
        2.2.6 培养基
        2.2.7 实验仪器
    2.3 试验方法与步骤
        2.3.1 菠萝c DNA模板的制备
        2.3.2 AcFTL1和AcFTL2及其相关基因的克隆
        2.3.3 AcFTL1和AcFTL2基因的表达量检测
        2.3.4 AcFTL1和AcFTL2蛋白的生物信息学分析
    2.4 结果与分析
        2.4.1 菠萝组织总RNA的完整性检测
        2.4.2 AcFTL1和AcFTL2基因的克隆
        2.4.3 AcFTL1和AcFTL2基因的相对表达量检测
        2.4.4 AcFTL1和AcFTL2蛋白的生物信息学分析
    2.5 结论与讨论
第3章 AcFTL1和AcFTL2基因功能鉴定
    3.1 引言
    3.2 材料与试剂
        3.2.1 试验材料
        3.2.2 酶
        3.2.3 试剂盒
        3.2.4 母液
        3.2.5 培养基
        3.2.6 菌种
    3.3 试验方法与步骤
        3.3.1 过表达载体构建
        3.3.2 转基因拟南芥阳性株系的获取
        3.3.3 转基因拟南芥的表型鉴定
    3.4 结果与分析
        3.4.1 过表达载体的构建
        3.4.2 转基因拟南芥阳性植株的获取
        3.4.3 转基因拟南芥的表型鉴定
    3.5 结论与讨论
第4章 AcFTL1和AcFTL2与互作蛋白的酵母双杂交验证
    4.1 引言
    4.2 材料与试剂
        4.2.1 试验材料
        4.2.2 酶
        4.2.3 试剂盒
        4.2.4 母液
        4.2.5 培养基
    4.3 方法与步骤
        4.3.1 AcFDL1、AcFDL2和Ac14-3-3L基因全长的克隆
        4.3.2 诱饵和猎物载体的构建
        4.3.3 Y2H-Gold酵母感受态的制备
        4.3.4 自激活活性检测
        4.3.5 诱饵蛋白与猎物蛋白的互作关系检测
    4.4 结果与分析
        4.4.1 AcFDL1、AcFDL2和Ac14-3-3L基因全长的克隆
        4.4.2 诱饵载体与猎物载体的构建
        4.4.3 诱饵蛋白的自激活活性检测
        4.4.4 诱饵蛋白与猎物蛋白的互作关系检测
    4.5 结论与讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]菠萝对乙烯利诱花的敏感性差异研究[J]. 张红娜,刘胜辉,孙伟生,李运合,孙光明,林文秋,张秀梅,吴青松.  热带作物学报. 2018(06)
[2]高等植物成花诱导的分子机理研究进展[J]. 周琴,张思思,包满珠,刘国锋.  分子植物育种. 2018(11)
[3]乙烯信号转导与植物非生物胁迫反应调控研究进展[J]. 赵赫,陈受宜,张劲松.  生物技术通报. 2016(10)
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[5]成花素基因FT及其调控机制研究进展[J]. 刘丽敏,陈福禄,张晓玫,武小霞,陈庆山,傅永福.  分子植物育种. 2016(07)
[6]miRNAs调控植物生长发育的研究进展[J]. 陈思,陈薇,庞基良.  北方园艺. 2016(05)
[7]赤霉素生物合成及信号转导途径研究进展[J]. 黄桃鹏,李媚娟,王睿,李玲.  植物生理学报. 2015(08)
[8]miR156介导的高等植物年龄途径研究进展[J]. 虞莎,王佳伟.  科学通报. 2014(15)
[9]植物SOC1/AGL20基因研究进展[J]. 马腾飞,林新春.  浙江农林大学学报. 2013(06)
[10]植物激素乙烯作用机制的最新进展[J]. 李文阳,马梦迪,郭红卫.  中国科学:生命科学. 2013(10)

硕士论文
[1]热激诱导表达Hd3a基因的水稻转化研究及Hd3a信号转导机理初探[D]. 郭辉.厦门大学 2009



本文编号：3201337