朱砂叶螨超氧化物歧化酶基因的克隆与表达分析

发布时间：2021-05-24 06:30

　　朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus（Boisduval）隶属于蛛形纲、蜱螨亚纲、叶螨科,是一种世界性的农业害螨,会危害豆类、棉花、蔬菜和果树等经济作物以及观赏植物。长期以来,对朱砂叶螨的防治主要以化学药剂为主,在应对环境胁迫时,机体内抗氧化酶在生理生化方面会发生一系列变化,而对于抗氧化酶基因在分子水平上的变化尚不清楚。本文以朱砂叶螨为研究对象,运用RT-PCR结合RACE技术克隆得到了朱砂叶螨3个超氧化物歧化酶SOD基因cDNA的全长,并进行了序列分析,并且通过qRT-PCR技术研究SOD基因在逆境胁迫下的mRNA表达水平,主要研究结果如下:一、朱砂叶螨超氧化物歧化酶基因序列的特征分析克隆得到了朱砂叶螨细胞质Cu/ZnSOD、细胞外Cu/ZnSOD和线粒体MnSOD的cDNA全长,分别命名为TcSOD1,TcSOD2和TcSOD3。TcSOD1基因GenBank登录号为KY348746,全长827 bp,其中开放阅读框（ORF）长为459 bp,编码152 aa,分子质量约为15.559 kDa,理论等电点pI为6.02,其氨基酸序列包含2个签名基序,分别是43-... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 朱砂叶螨的研究现状
        1.1.1 朱砂叶螨生物学特征
        1.1.2 朱砂叶螨的抗性研究
        1.1.3 朱砂叶螨的防治
    1.2 超氧化物歧化酶基因的研究进展
        1.2.1 超氧化物歧化酶概述
        1.2.2 SOD的分子结构、理化性质和三维结构
        1.2.3 SOD基因研究进展
    1.3 本研究的意义及主要内容
        1.3.1 本研究的意义
        1.3.2 本研究的主要内容
第2章 朱砂叶螨超氧化物歧化酶基因的克隆及分析
    2.1 材料与方法
        2.1.1 供试螨源
        2.1.2 主要仪器和试剂
        2.1.3 朱砂叶螨总RNA的提取
        2.1.4 cDNA第一链的合成
        2.1.5 朱砂叶螨5’和3’RACE cDNA的准备
        2.1.6 朱砂叶螨SOD基因全长的克隆
        2.1.7 三种SOD基因全长的获得及生物信息学分析
        2.1.8 朱砂叶螨SOD基因的同源性和系统发育分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 朱砂叶螨Tc SOD基因全长的克隆
        2.2.2 朱砂叶螨Tc SOD基因全长的生物信息学分析
        2.2.3 Tc SOD的同源性与系统发育分析
    2.3 讨论
第3章 朱砂叶螨Tc SOD在环境胁迫下的mRNA表达特性
    3.1 材料与方法
        3.1.1 供试螨源
        3.1.2 主要仪器和试剂
        3.1.3 朱砂叶螨样品的收集
        3.1.4 不同温度处理雌成螨
        3.1.5 不同杀螨剂处理雌成螨
        3.1.6 总RNA提取
        3.1.7 cDNA第一链的合成
        3.1.8 RT-qPCR引物设计
        3.1.9 RT-qPCR检测不同逆境胁迫下SOD表达水平
        3.1.10 荧光定量数据分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 荧光定量PCR溶解曲线
        3.2.2 温度胁迫下Tc SOD的表达研究
        3.2.3 不同杀螨剂胁迫下Tc SOD的表达研究
    3.3 讨论
第4章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]朱砂叶螨的识别与防治[J]. 王泽华,宫亚军,魏书军,康总江,朱亮,金桂华,石宝才.  中国蔬菜. 2013(05)
[2]中华蜜蜂铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆、序列分析及表达特征[J]. 刘俊峰,刘亭亭,王欢,王子龙,颜伟玉,曾志将,吴小波.  动物营养学报. 2012(08)
[3]柞蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与表达分析[J]. 姚立虎,朱保建,刘朝良,魏国清,吴祥,曹甲,钱岑,汤良文,周炎.  蚕业科学. 2009(03)
[4]我国朱砂叶螨研究进展[J]. 刘波,桂连友.  长江大学学报(自科版)农学卷. 2007(03)
[5]超氧化物歧化酶研究和应用进展[J]. 李敬玺,刘继兰,王选年,银梅,葛亚明,唐海蓉.  动物医学进展. 2007(07)
[6]野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆分析与原核表达[J]. 丛海峰,徐世清,司马杨虎,张升祥,王更先,董航,刘莹,柳学广.  蚕业科学. 2007(02)
[7]粘虫胶防治冬枣红蜘蛛的效果[J]. 巴秀成,王小梦,常会红,周霞.  中国南方果树. 2007(02)
[8]用自助法统计推断炔螨特对桑树朱砂叶螨的防治效果[J]. 吴福安,余茂德,王兴科,程嘉翎.  蚕业科学. 2006(04)
[9]利用SPSS软件计算杀虫剂的LC50[J]. 贾春生.  昆虫知识. 2006(03)
[10]不同寄主植物对二斑叶螨和朱砂叶螨发育历期和产卵量的影响[J]. 马俐,贾炜,洪晓月,王冬生.  南京农业大学学报. 2005(04)

博士论文
[1]朱砂叶螨对苯甲酰基脲类杀虫剂胁迫的响应及机制研究[D]. 辛天蓉.南昌大学 2015

硕士论文
[1]柑桔全爪螨超氧化物歧化酶基因克隆与功能初探[D]. 冯英财.西南大学 2016
[2]烟粉虱超氧化物歧化酶功能基因研究[D]. 高现龙.浙江大学 2013
[3]朱砂叶螨酯酶同工酶研究及酯酶cDNA克隆与序列分析[D]. 曹小芳.西南农业大学 2005



本文编号：3203721