大豆抗病毒基因GmNH23的功能域分析及其SMV效应蛋白的鉴定
发布时间：2021-06-12 23:18
植物体内具有化学、物理、生物等多种策略抵抗病原体的入侵,植物防御系统中最重要的一种策略是依赖于由抗性基因（Resistance gene,R）编码的蛋白,其能够特异性识别病原体。大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）在全球大豆生产中是最普遍的病毒。SMV是Potyviridae家族中Potyvirus属的成员,其基因组是单链正义RNA,编码10种蛋白质,分别是P1、HC-Pro、P3、6K1、CI、6K2、NIa-VPg、NIa-Pro、NIb、CP。对不同SMV株系具有抗性的多个独立抗性基因座已被鉴定,其中大多数是非Toll白介素受体-核苷酸结合位点-亮氨酸重复（Non-TIR-NBS-LRR）类型的R基因。烟草中已经发现了抗TMV的N基因,N基因属于NBS-LRR类的R基因。我们实验室的前期研究在大豆基因组上发现一个与N基因同源的并对TMV和SMV都具有抗性的基因,将其命名为GmNH23（Glycine max NHomolog 23）。本研究的目的是确定GmNH23编码对SMV具有抗性的功能结构域,将GmNH23蛋白按照结构域预测网站将其分成5个部分,分...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大豆花叶病毒的基因组组织
内蒙古大学硕士论文因分别简称为 p1、hc-pro、p3、6k1、ci、nia-vpg、nia-pro、nib、coat。本实验过表达载体为 pCAMBIA-Cluc，简称 pC-LUC。在载体上的多克隆位点内选择pn I 作为目的基因特异性引物的酶切位点，由于 hc-pro 目的基因内存在这两个所以 hc-pro 使用 EcoRⅠ和 XholⅠ两种酶切位点设计引物。利用 Primer3 软件式合成引物：c-pro 外的目的基因引物设计：Forward Primer 保护碱基+Sac I 酶切位点+分段基因上游引物Reverse Primer 保护碱基+ Kpn I 酶切位点+分段基因下游引物ro 引物设计：Forward Primer 保护碱基+EcoR I 酶切位点+分段基因上游引物Reverse Primer 保护碱基+Xhol I 酶切位点+分段基因下游引物
tive control; 5-6: pGEM-T-duf and negative control; 7-8: pGEM-T-tn and negative control; 9-10: pGEM and negative control（b）DigestionidentificationofrecombinantplasmidsM:DM2000DNAMaker（frombottomtotop:1250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000 bp）1: pGEM-T-tir; 2: pGEM-T-nb; 3: pGEM-T-duf; 4: pGEM; 5: pGEM-T-nd3.2 GmNH23 截段基因过表达载体的构建为了在植物中表达 GmNH23 截段基因，将 3.1 中测序鉴定正确的目的基因构建到植元表达载体 pC-LUC 中，得到的重组质粒进行质粒 PCR 和酶切鉴定（如图 3.2.1）。显示 GmNH23 的 5 个截段基因的植物双元载体均构建成功。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆对大豆花叶病毒SC-11株系抗性的遗传及基因定位[J]. 白丽,李海朝,马莹,王大刚,刘宁,智海剑. 大豆科学. 2009(01)
[2]大豆抗花叶病毒及耐疫霉根腐病的SSR标记分析[J]. 卢双勇,韩英鹏,滕卫丽,李文滨. 大豆科学. 2008(05)
[3]大豆对SMVSC-13株系群的抗性遗传及基因定位的研究[J]. 郭东全,王延伟,智海剑,盖钧镒,李海朝,李凯. 大豆科学. 2007(01)
[4]与大豆SMV3号株系抗性相关的分子标记的鉴定[J]. 栾晓燕,李宗飞,满为群,白羊年,马岩松,刘鑫磊,郑宝香,杜维广. 分子植物育种. 2006(06)
[5]大豆SMV3号株系抗病基因的SSR标记[J]. 滕卫丽,李文滨,邱丽娟,韩英鹏,赵桂云,关荣霞,常汝镇. 大豆科学. 2006(03)
[6]黄淮中北部大豆花叶病毒株系的鉴定与分布[J]. 郭东全,智海剑,王延伟,盖钧镒,周新安,杨崇良,李凯,李海朝. 中国油料作物学报. 2005(04)
[7]大豆5个花叶病毒株系抗性基因的定位[J]. 王永军,东方阳,王修强,杨雅麟,喻德跃,盖钧镒,吴晓雷,贺超英,张劲松,陈受宜. 遗传学报. 2004(01)
[8]黄淮和长江中下游地区大豆花叶病毒株系鉴定与分布[J]. 王修强,盖钧镒,濮祖芹. 大豆科学. 2003(02)
[9]大豆对SMV3号株系的抗性遗传分析及抗病基因的RAPD标记研究[J]. 郑翠明,常汝镇,邱丽娟. 中国农业科学. 2001(01)
本文编号：3226492
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大豆花叶病毒的基因组组织
内蒙古大学硕士论文因分别简称为 p1、hc-pro、p3、6k1、ci、nia-vpg、nia-pro、nib、coat。本实验过表达载体为 pCAMBIA-Cluc，简称 pC-LUC。在载体上的多克隆位点内选择pn I 作为目的基因特异性引物的酶切位点，由于 hc-pro 目的基因内存在这两个所以 hc-pro 使用 EcoRⅠ和 XholⅠ两种酶切位点设计引物。利用 Primer3 软件式合成引物：c-pro 外的目的基因引物设计：Forward Primer 保护碱基+Sac I 酶切位点+分段基因上游引物Reverse Primer 保护碱基+ Kpn I 酶切位点+分段基因下游引物ro 引物设计：Forward Primer 保护碱基+EcoR I 酶切位点+分段基因上游引物Reverse Primer 保护碱基+Xhol I 酶切位点+分段基因下游引物
tive control; 5-6: pGEM-T-duf and negative control; 7-8: pGEM-T-tn and negative control; 9-10: pGEM and negative control（b）DigestionidentificationofrecombinantplasmidsM:DM2000DNAMaker（frombottomtotop:1250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000 bp）1: pGEM-T-tir; 2: pGEM-T-nb; 3: pGEM-T-duf; 4: pGEM; 5: pGEM-T-nd3.2 GmNH23 截段基因过表达载体的构建为了在植物中表达 GmNH23 截段基因，将 3.1 中测序鉴定正确的目的基因构建到植元表达载体 pC-LUC 中，得到的重组质粒进行质粒 PCR 和酶切鉴定（如图 3.2.1）。显示 GmNH23 的 5 个截段基因的植物双元载体均构建成功。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆对大豆花叶病毒SC-11株系抗性的遗传及基因定位[J]. 白丽,李海朝,马莹,王大刚,刘宁,智海剑. 大豆科学. 2009(01)
[2]大豆抗花叶病毒及耐疫霉根腐病的SSR标记分析[J]. 卢双勇,韩英鹏,滕卫丽,李文滨. 大豆科学. 2008(05)
[3]大豆对SMVSC-13株系群的抗性遗传及基因定位的研究[J]. 郭东全,王延伟,智海剑,盖钧镒,李海朝,李凯. 大豆科学. 2007(01)
[4]与大豆SMV3号株系抗性相关的分子标记的鉴定[J]. 栾晓燕,李宗飞,满为群,白羊年,马岩松,刘鑫磊,郑宝香,杜维广. 分子植物育种. 2006(06)
[5]大豆SMV3号株系抗病基因的SSR标记[J]. 滕卫丽,李文滨,邱丽娟,韩英鹏,赵桂云,关荣霞,常汝镇. 大豆科学. 2006(03)
[6]黄淮中北部大豆花叶病毒株系的鉴定与分布[J]. 郭东全,智海剑,王延伟,盖钧镒,周新安,杨崇良,李凯,李海朝. 中国油料作物学报. 2005(04)
[7]大豆5个花叶病毒株系抗性基因的定位[J]. 王永军,东方阳,王修强,杨雅麟,喻德跃,盖钧镒,吴晓雷,贺超英,张劲松,陈受宜. 遗传学报. 2004(01)
[8]黄淮和长江中下游地区大豆花叶病毒株系鉴定与分布[J]. 王修强,盖钧镒,濮祖芹. 大豆科学. 2003(02)
[9]大豆对SMV3号株系的抗性遗传分析及抗病基因的RAPD标记研究[J]. 郑翠明,常汝镇,邱丽娟. 中国农业科学. 2001(01)
本文编号：3226492
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