金铁锁HMGR、FPS、SE和P450基因克

发布时间：2021-06-29 20:30

　　稀有濒危物种金铁锁（Psammosilene tunicoides）为石竹科（Caryophyllaceae）单种属植物,以根入药,是“云南白药”的主成分之一,主要有效成分为金铁锁三萜总皂苷。金铁锁自然繁殖力低,生长缓慢,加之金铁锁药材大部分依赖野生采挖,使之野生资源日益减少,几近枯竭,已不能满足市场需求。从分子水平阐明金铁锁三萜总皂苷生物合成途径,找到控制三萜皂苷合成的关键酶基因,利用基因工程技术对金铁锁三萜皂苷进行体外合成,是获得金铁锁三萜皂苷快速而有效的新途径。本研究从金铁锁中克隆了4个可能参与三萜皂苷合成关键酶基因,成功构建原核表达体系诱导蛋白表达,检测了关键酶基因的组织表达差异。主要研究内容如下:基于课题组前期研究中所获得的金铁锁转录组信息,从大量转录本信息中筛选了可能参与金铁锁三萜皂苷合成的序列,包括参与三萜前体形成的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）、法尼基焦磷酸合成酶（FPS）,骨架构建阶段的鲨烯环氧酶（SE）,以及修饰阶段的细胞色素P450单加氧酶（P450）等关键酶基因。根据转录本序列,设计各基因的全长扩增引物,利用RT-PCR方法获得金铁锁各基因的全... 

【文章来源】：云南中医药大学云南省

【文章页数】：110 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
第一章 金铁锁HMGR的克隆、原核表达及生物信息学分析
    第一节 实验材料、试剂及仪器
        1 实验材料
        2 实验试剂
        3 实验仪器
    第二节 实验方法
        1 金铁锁HMGR基因克隆
        2 HMGR基因的原核表达
        3 HMGR生物信息学分析
    第三节 实验结果
        1 金铁锁根部RNA的提取
        2 金铁锁HMGR的克隆
        3 金铁锁HMGR的原核表达
        4 金铁锁HMGR的生物信息学分析
第二章 金铁锁FPS的克隆、原核表达及生物信息学分析
    第一节 实验材料、试剂及仪器
    第二节 实验方法
    第三节 实验结果
        1 金铁锁FPS的克隆
        2 金铁锁FPS的原核表达
        3 金铁锁FPS的生物信息学分析
第三章 金铁锁SE的克隆、原核表达及生物信息学分析
    第一节 实验材料、试剂及仪器
    第二节 实验方法
    第三节 实验结果
        1 金铁锁SE的克隆
        2 金铁锁SE的原核表达
        3 金铁锁SE的生物信息学分析
第四章 金铁锁P450的克隆、原核表达及生物信息学分析
    第一节 实验材料、试剂及仪器
    第二节 实验方法
    第三节 实验结果
        1 金铁锁P450的克隆
        2 金铁锁P450的原核表达
        3 金铁锁P450的生物信息学分析
第五章 金铁锁8个关键酶基因的表达分析
    第一节 实验材料、试剂及仪器
        1 实验材料
        2 实验试剂
        3 实验仪器
    第二节 实验方法
        1 金铁锁根、茎、叶RNA提取
        2 cDNA合成
        3 确定进行荧光检测的基因及引物设计
        4 Real-time PCR反应
    第三节 实验结果
第六章 讨论
第七章 文献综述
    第一节 植物萜类化合物生物合成途径及其关键酶
        1 植物萜类化合物生物合成途径
        2 甲羟戊酸途径中的关键酶
    第二节 金铁锁及其三萜皂苷的研究现状
        1 金铁锁简介
        2 金铁锁三萜皂苷的研究
    第三节 实时荧光定量PCR
    第四节 本研究的目的及意义
参考文献
附录
致谢



本文编号：3257110