髓系肿瘤中DLX4基因的表观遗传学调控机制及其临床意义

发布时间：2021-06-29 21:42

　　目的探究急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia,AML）、慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）和骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）三种髓系肿瘤患者中DLX4（distal-less homeobox 4）表达和启动子甲基化态势,同时分析其相关性和临床意义。方法应用实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RQ-PCR）检测37例正常人、102例AML患者及56例CML患者骨髓单个核细胞中DLX4转录本水平。应用实时定量甲基化特异性PCR（real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP）方法检测52例正常人、173例AML患者、87例CML患者及103例MDS患者骨髓单个核细胞中DLX4启动子甲基化水平。同时应用亚硫酸氢盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）方法验证有标本中的DLX4甲基化密度。应用去甲基化药物5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deox... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略语
第一章 引言
    1.1 髓系肿瘤
    1.2 表观遗传学与DNA甲基化
    1.3 DLX4
第二章 研究目的、方案设计、意义
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法设计
    2.3 研究的意义
第三章 材料和方法
    3.1 材料
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 引物
    3.2 方法
        3.2.1 骨髓单个核细胞的分离、提取总RNA和基因组DNA
        3.2.2 亚硫酸盐修饰基因组DNA
        3.2.3 逆转录合成c DNA
        3.2.4 实时定量PCR检测DLX4的表达
        3.2.5 实时定量甲基化特异性PCR检测DLX4甲基化的水平
        3.2.6 亚硫酸氢盐测序PCR检测DLX4甲基化的密度
        3.2.7 PCR产物纯化回收
        3.2.8 重组载体构建
        3.2.9 重组质粒转化
        3.2.10 重组质粒提取
        3.2.11 质粒鉴定、测序
        3.2.12 阳性模板建立
        3.2.13 细胞遗传学检查
        3.2.14 基因突变检测
        3.2.15 融合基因检测
        3.2.16 统计学处理
第四章 结果
    4.1 AML中DLX4表达、甲基化及其相关关系
        4.1.1 对照组和AML患者中DLX4表达
        4.1.2 AML患者中DLX4表达的ROC曲线
        4.1.3 DLX4表达与AML患者临床参数的相关性
        4.1.4 DLX4表达与AML患者预后的关系
        4.1.5 对照组和AML患者中DLX4启动子1甲基化水平
        4.1.6 对照组和AML患者中DLX4启动子2甲基化水平
        4.1.7 AML患者中DLX4甲基化的ROC曲线
        4.1.8 DLX4甲基化与AML患者临床参数的相关性
        4.1.9 DLX4甲基化与AML患者预后的关系
        4.1.10 AML患者中DLX4甲基化与表达的关系
        4.1.11 AML细胞株中 5-aza-d C对DLX4甲基化和表达的影响
    4.2 CML中DLX4表达、甲基化及其相关关系
        4.2.1 CML患者中DLX4甲基化
        4.2.2 同一CML患者不同时期DLX4甲基化
        4.2.3 CML患者中DLX4甲基化的ROC曲线
        4.2.4 DLX4甲基化与CML患者临床参数的相关性
        4.2.5 CML患者中DLX4甲基化与表达的关系
        4.2.6 CML细胞株中 5-aza-d C对DLX4的甲基化和表达的影响
    4.3 MDS中DLX4甲基化的临床意义
        4.3.1 MDS患者中DLX4甲基化
        4.3.2 MDS患者中DLX4甲基化的ROC曲线
        4.3.3 DLX4甲基化与MDS患者临床参数的相关性
        4.3.4 DLX4甲基化与MDS患者预后的关系
第五章 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA甲基化研究方法的回顾与评价[J]. 顾婷婷,张忠明,郑鹏生.  中国妇幼健康研究. 2006(06)



本文编号：3257214