Se14在油菜素内酯调控途径中的功能研究及水稻早抽穗突变体e22的基因克隆

发布时间：2021-07-03 04:10

　　水稻是最重要的粮食作物之一,提高水稻的产量对从世界范围内消除饥饿、解决温饱的重要性不言而喻。抽穗期是水稻的重要农艺性状,研究和改良水稻抽穗期,对于水稻的稳产和高产具有意义。油菜素内酯途径可从多方面影响水稻的株型发育,进而影响水稻的产量。之前研究中,我们克隆了一个早抽穗基因Se14,为了进一步分析Se14的功能,我们利用CRISPR/Cas9技术在野生型日本晴背景下对Se14基因进行敲除实验,验证了Se14的一因多效性;同时,对se14进行了BR处理,并对BR合成和信号转导相关基因的表达量情况进行了分析。另一方面,我们利用MutMp技术a克隆了水稻早抽穗基因E22;利用酵母双杂技术筛选到ZM17转录因子的多个互作蛋白。主要结果如下:1.突变体se14除抽穗期早于日本晴外,还表现出矮化、穗颈缩短、叶片直立的突变表型。利用CRISPR/Cas9技术,我们获得了6个独立的Se14的敲除植株,这些株系抽穗期均早于野生型日本晴,同时表现出叶片直立、稻穗长和节间长度缩短、株高降低等表型。这说明Se14可能具有一因多效性,可同时控制水稻的多个性状。2.当施加24-eBL进行处理时,随着浓度的增加,突变... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 Se14在油菜素内酯调控途径中的功能研究
    1 综述
        引言
        1.1 油菜素内酯的生物合成及信号转导研究进展
            1.1.1 OsBRI1的调控机制
            1.1.2 OsBZR1的调控机制
            1.1.3 GSK2的调控机制
            1.1.4 DLT的调控机制
            1.1.5 RLA1的调控机制
            1.1.6 OsLIC的调控机制
            1.1.7 BU1的调控机制
        1.2 表观遗传学与组蛋白修饰
            1.2.1 表观遗传学概述
            1.2.2 水稻中组蛋白甲基化修饰研究进展
        1.3 CRISPR/Cas9敲除技术
    2 本研究的目的与意义
    3 材料与方法
        3.1 实验材料
            3.1.1 植物材料
            3.1.2 主要实验仪器
            3.1.3 主要的试剂
        3.2 实验方法
            3.2.1 se14突变体、敲除突变体材料主要农艺性状调查
            3.2.2 DNA粗提(CTAB法)
            3.2.3 PCR扩增及电泳检测
            3.2.4 水稻总RNA的提取及反转录
            3.2.5 油菜素内酯对水稻幼苗的处理
            3.2.6 实时荧光定量PCR
    4 实验结果
        4.1 Se14在油菜素内酯调控途径中的功能研究
            4.1.1 se14突变体表型鉴定和遗传分析
            4.1.2 CRISPR/Cas9敲除突变体的表型鉴定
            4.1.3 突变体se14对油菜素内酯的响应
    5 讨论
        5.1 Se14调控水稻开花并介导BR信号转导通路
第二部分 水稻早抽穗基因E22的MutMap克隆
    1 综述
        1.1 拟南芥开花的研究进展
        1.2 水稻抽穗期的研究进展
        1.3 MutMap克隆
    2 本研究的目的与意义
    3 材料与方法
        3.1 实验材料
            3.1.1 植物材料
            3.1.2 主要实验仪器
            3.1.3 主要的试剂
    4 实验结果
        4.1 水稻早抽穗基因E22的MutMap克隆
            4.1.1 e22突变体表型分析
            4.1.2 e22突变性状的遗传分析
            4.1.3 E22的MutMap克隆
    5 讨论
        5.1 水稻早抽穗基因的MutMap克隆
第三部分 转录因子ZM17互作蛋白的筛选
    1 综述
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 水稻材料
            2.1.2 实验仪器
            2.1.3 实验所用载体和菌株
            2.1.4 主要的试剂及培养基
        2.2 实验方法
            2.2.1 载体构建
                2.2.1.1 酶切
                2.2.1.2 连接
                2.2.1.3 转化
            2.2.2 酵母双杂交技术
                2.2.2.1 酵母感受态的制备(确保整个过程在无菌条件下操作)
                2.2.2.2 酵母转化
                2.2.2.3 互作蛋白的筛选
    3 实验结果
        3.1 转录因子ZM17互作蛋白的筛选
    4 讨论
        4.1 转录因子ZM17互作蛋白的筛选
参考文献
致谢



本文编号：3261838