蒺藜苜蓿CIM基因克隆及紫花苜蓿遗传转化
发布时间：2021-07-22 09:53
CIM（Cytokinin Induced Message）基因属于expansin-B2家族,目前关于CIM基因的研究集中在豆科植物的叶片发育方面。蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）是一年生草本植物,具有生长速度快,染色体组数量少（2n=16）,转基因研究过程中转化效率高等优点,是研究豆科植物遗传学的模式植物。紫花苜蓿（Medicago sativa）因具有高蛋白含量,丰富的维生素和微量元素,产量高等优点,成为人工种植范围最大的牧草之一。本研究旨在探究蒺藜苜蓿CIM基因在紫花苜蓿中表达是否对其叶片发育产生影响。试验以蒺藜苜蓿R108品种为材料,首先在蒺藜苜蓿中克隆出CIM基因,该基因编码区长度为828bp,编码275个氨基酸。而后将该基因连于3302-3flag载体上,构建植物表达载体。将构建的植物表达载体以农杆菌转化的方法导入紫花苜蓿叶片中,通过植物组织培养获得转基因紫花苜蓿植株,观察转基因紫花苜蓿的表型。结果表明转入CIM基因的紫花苜蓿复叶叶片出现发育异常现象,与野生型紫花苜蓿相比,植株相对矮小,叶片呈现梨形,基部的分枝数量增加。同时,本研究进一步完善了紫花苜蓿组...
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1大肠杆菌转化
蒺藜苜蓿CIM基因克隆及初步鉴定223结果与分析3.1构建植物表达载体结果3.1.1大肠杆菌转化结果通过凝胶电泳鉴定结果如图3.1.1,胶图显示条带清晰，说明大肠杆菌中成功转入CIM基因，可以进行下一步试验。图3.1.1大肠杆菌转化Figure3.1.1E.coiltransformation3.1.2构建植物表达载体结果通过凝胶电泳鉴定结果如图3.1.2，胶图显示条带清晰，除8号外，其余载体构建成功。图3.1.2构建植物表达载体M12345M1234567891011121314
结果与分析23Figure3.1.2Constructionofplantexpressionvector3.1.3农杆菌转化结果通过凝胶电泳鉴定结果如图3.1.3，胶图显示条带清晰，说明农杆菌中成功转入CIM基因，可以进行遗传转化试验。图3.1.3农杆菌转化Figure3.1.3Agrobacterium-mediatedtransformation3.2植物组织培养结果3.2.1紫花苜蓿的转化和共培养用已经经过鉴定的农杆菌菌液，浸泡已经切割好的紫花苜蓿叶片，通过农杆菌介导转化法侵染紫花苜蓿叶片，转化完成后用无菌滤纸吸干叶片上多余菌液，将叶片放置在SM4共培养基上进行共培养，如图3.2.1。图3.2.1共培养阶段Figure3.2.1Co-culturestageM1234567
【参考文献】：
期刊论文
[1]施氮对不同水分条件下紫花苜蓿氮素吸收及根系固氮酶活性的影响[J]. 高丽敏,苏晶,田倩,沈益新. 草业学报. 2020(03)
[2]外源ABA对苏打盐碱胁迫的紫花苜蓿内源激素含量的影响[J]. 李红,李波,杨曌. 黑龙江畜牧兽医. 2020(06)
[3]紫花苜蓿MsERF003的基因克隆及其在干旱胁迫中的功能分析[J]. 坚伟宁,左朋,张国珍,范杰英,邢少辰,郑梅竹,韦正乙. 分子植物育种. 2020(17)
[4]转OvBAN/bar双价基因的紫花苜蓿对虫蚀及除草剂的耐受性分析[J]. 董文科,陈春艳,马晖玲. 草业学报. 2019(07)
[5]AtSOS基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[J]. 麻冬梅,秦楚. 草业学报. 2018(06)
[6]碱胁迫应答基因GsARHP的克隆及转基因紫花苜蓿的耐碱性分析[J]. 陈冉冉,朱娉慧,贾博为,宋雪薇,王子君,李佶娜,李强,丁晓东,朱延明. 草业学报. 2017(09)
[7]豆科复叶发育分子遗传机制的研究进展[J]. 杨霞,高金珊,杨素欣. 植物生理学报. 2017(06)
[8]白桦扩展蛋白基因的克隆分析及植物表达载体构建[J]. 王子剑,孙丹,于颖,张岩,王超. 西南林业大学学报. 2016(01)
[9]抗旱性不同的小麦扩展蛋白活性及基因表达分析[J]. 赵美荣,李永春,刘辉,秦海强. 江苏农业科学. 2016(01)
[10]紫花苜蓿转基因研究进展[J]. 何平,韦正乙,孙卉,邢少辰. 草业科学. 2013(04)
硕士论文
[1]UFO基因对紫花苜蓿的转化及转基因鉴定[D]. 李思峰.北京林业大学 2019
[2]紫花苜蓿MsTHI1基因克隆及抗旱功能分析[D]. 尹航.东北农业大学 2019
[3]紫花苜蓿防御基因MsDefl转化甘蔗及抗病转基因植株的筛选[D]. 沈林波.海南大学 2012
本文编号：3296930
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1大肠杆菌转化
蒺藜苜蓿CIM基因克隆及初步鉴定223结果与分析3.1构建植物表达载体结果3.1.1大肠杆菌转化结果通过凝胶电泳鉴定结果如图3.1.1,胶图显示条带清晰，说明大肠杆菌中成功转入CIM基因，可以进行下一步试验。图3.1.1大肠杆菌转化Figure3.1.1E.coiltransformation3.1.2构建植物表达载体结果通过凝胶电泳鉴定结果如图3.1.2，胶图显示条带清晰，除8号外，其余载体构建成功。图3.1.2构建植物表达载体M12345M1234567891011121314
结果与分析23Figure3.1.2Constructionofplantexpressionvector3.1.3农杆菌转化结果通过凝胶电泳鉴定结果如图3.1.3，胶图显示条带清晰，说明农杆菌中成功转入CIM基因，可以进行遗传转化试验。图3.1.3农杆菌转化Figure3.1.3Agrobacterium-mediatedtransformation3.2植物组织培养结果3.2.1紫花苜蓿的转化和共培养用已经经过鉴定的农杆菌菌液，浸泡已经切割好的紫花苜蓿叶片，通过农杆菌介导转化法侵染紫花苜蓿叶片，转化完成后用无菌滤纸吸干叶片上多余菌液，将叶片放置在SM4共培养基上进行共培养，如图3.2.1。图3.2.1共培养阶段Figure3.2.1Co-culturestageM1234567
【参考文献】：
期刊论文
[1]施氮对不同水分条件下紫花苜蓿氮素吸收及根系固氮酶活性的影响[J]. 高丽敏,苏晶,田倩,沈益新. 草业学报. 2020(03)
[2]外源ABA对苏打盐碱胁迫的紫花苜蓿内源激素含量的影响[J]. 李红,李波,杨曌. 黑龙江畜牧兽医. 2020(06)
[3]紫花苜蓿MsERF003的基因克隆及其在干旱胁迫中的功能分析[J]. 坚伟宁,左朋,张国珍,范杰英,邢少辰,郑梅竹,韦正乙. 分子植物育种. 2020(17)
[4]转OvBAN/bar双价基因的紫花苜蓿对虫蚀及除草剂的耐受性分析[J]. 董文科,陈春艳,马晖玲. 草业学报. 2019(07)
[5]AtSOS基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[J]. 麻冬梅,秦楚. 草业学报. 2018(06)
[6]碱胁迫应答基因GsARHP的克隆及转基因紫花苜蓿的耐碱性分析[J]. 陈冉冉,朱娉慧,贾博为,宋雪薇,王子君,李佶娜,李强,丁晓东,朱延明. 草业学报. 2017(09)
[7]豆科复叶发育分子遗传机制的研究进展[J]. 杨霞,高金珊,杨素欣. 植物生理学报. 2017(06)
[8]白桦扩展蛋白基因的克隆分析及植物表达载体构建[J]. 王子剑,孙丹,于颖,张岩,王超. 西南林业大学学报. 2016(01)
[9]抗旱性不同的小麦扩展蛋白活性及基因表达分析[J]. 赵美荣,李永春,刘辉,秦海强. 江苏农业科学. 2016(01)
[10]紫花苜蓿转基因研究进展[J]. 何平,韦正乙,孙卉,邢少辰. 草业科学. 2013(04)
硕士论文
[1]UFO基因对紫花苜蓿的转化及转基因鉴定[D]. 李思峰.北京林业大学 2019
[2]紫花苜蓿MsTHI1基因克隆及抗旱功能分析[D]. 尹航.东北农业大学 2019
[3]紫花苜蓿防御基因MsDefl转化甘蔗及抗病转基因植株的筛选[D]. 沈林波.海南大学 2012
本文编号：3296930
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3296930.html
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