草菇锰超氧化物歧化酶基因异源表达条件优化及其耐胁迫功能分析

发布时间：2021-07-25 13:08

　　根据草菇（Volvariella volvacea）的锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因序列,构建重组质粒pBAR GPE1/Mn-SOD,转化大肠杆菌（Escherichia coli）Stbl3菌株,采用单因素实验对诱导剂IPTG浓度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)、诱导培养时间（0、2、4、6、8、10 h）及MnCl₂浓度(0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1)进行优化,以获得最优表达条件。在最优条件下分别进行耐热性、耐冷性及耐盐性分析,测定重组菌pBAR GPE1/Mn-SOD和对照菌pBAR GPE1的SOD酶活力及生长情况。结果表明:最优表达条件为IPTG浓度1 mmol·L^-1,诱导培养时间6 h,不需要添加MnCl₂;在最优条件下,与对照菌相比,发现重组菌的SOD酶活力显著提高,生长情况较好,提高了转化菌株的耐热性、耐冷性和耐盐性。 

【文章来源】：食用菌学报. 2020,27(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

PCR 扩增重组菌Mn-SOD基因的

从图2可以看到,在相对分子质量15000～25000之间出现一条明显的蛋白质条带,与草菇Mn-SOD蛋白质的理论相对分子质量19530吻合。2.3 重组菌表达Mn-SOD蛋白质的最优表达条件

在加入诱导剂后重组蛋白质Mn-SOD开始积累,随着培养时间增加,Mn-SOD表达量逐渐增加,在6 h时(泳道4)达到最高;之后随着培养时间的继续增加,Mn-SOD的表达量开始下降;当诱导时间为0～6 h时,平均灰度值逐渐增加,分别是41.969、42.909、45.172、68.347,因此最佳诱导培养时间为6 h(图4)。2.3.3 MnCl2浓度

【参考文献】：
期刊论文
[1]虎奶菇Mn-SOD提取、鉴定及基因的克隆[J]. 杨加亮,田云恒,马爱民.  食品工业科技. 2020(15)
[2]Mn-SOD的提取及其应用研究进展[J]. 秦松,何雨峰,况嘉铀,范淑敏,黄邵培,王伟平.  食品工业科技. 2019(15)
[3]草菇子实体提取物的抗氧化活性[J]. 杨健华,秦惠娟,彭璐,王琦,李玉.  食用菌学报. 2017(02)
[4]Cu/Zn-SOD基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达[J]. 姚冉,李轶女,张志芳,沈桂芳,潘沈元.  生物技术通报. 2012(11)
[5]西伯利亚蓼PsMnSOD基因的耐盐碱性鉴定及其在盐碱胁迫下的表达模式[J]. 付畅,张恒,刘关君,杨传平.  分子植物育种. 2009(05)
[6]柽柳MnSOD基因的克隆及功能验证[J]. 王丙锋,杨传平,王玉成,李红艳.  分子植物育种. 2007(05)

硕士论文
[1]高温胁迫下香菇疏水蛋白和热激蛋白的转录表达量变化及功能研究[D]. 辛苗苗.南京农业大学 2016
[2]盐生杜氏藻锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的基因克隆、表达与功能研究[D]. 邓婷婷.四川大学 2007



本文编号：3302088