多重PCR结合毛细管电泳检测骨髓增殖性肿瘤患者JAK2V617F及CALR基因突变

发布时间：2021-08-09 08:07

　　目的:应用多重PCR与毛细管DNA电泳法检测骨髓增殖性肿瘤（MPN）主要致病基因中的JAK2V617F及CALR第九外显子突变,并对该方法的检测性能进行评价。方法:同时设计特异性的JAK2617F等位基因突变PCR引物以及CALR基因第九外显子扩增引物,对引物进行Cy5荧光标记,所有引物在同一PCR反应管中进行扩增,并将PCR产物进行毛细管电泳分析,同时验证该方法的检测限、灵敏度,并与商品化试剂盒进行对比。结果:多重PCR与毛细管电泳技术结合可在一个PCR反应中同时检测JAK2V617F与CALR基因突变,可以在0.01 ng的基因组DNA中检测出JAK2V617F突变,可在0.1 ng的基因组DNA检测出JAK2V617F与CALR双阳性突变,至少可检测出0.1%的JAK2V617F阳性突变,该方法与商品化诊断试剂盒进行对比结果相一致。结论:基于多重PCR与毛细管电泳技术,可在外周血中同时检测JAK2V617F与CLAR基因第九外显子突变,该方法为MPN的诊断提供了新的分子检测手段。 

【文章来源】：中国实验血液学杂志. 2020,28(06)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
材料和方法
    试剂与仪器
    全血DNA的提取及浓度检测
    突变位点引物设计
    多重PCR反应
    毛细管电泳分析
    JAK2V617F检出限
    JAK2V617F与CLAR双阳性突变检出限
    JAK2V617F突变负荷检出限
    实验结果验证与数字统计
结果
    多重PCR扩增产物的毛细管电泳技术分离
    JAK2V617F检出限检测
    JAK2V617F与CLAR双阳性突变检出限
    JAK2V617F突变负荷检出限
    结果验证
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]BCR-ABL阴性骨髓增殖性肿瘤208例临床分析[J]. 沈庆慧,郭玉洁,薛春娥,王艳,林凤茹.  中国实验血液学杂志. 2019(01)
[2]JAK2V617F突变负荷量对ET患者临床表现和生存影响的研究[J]. 赵世香,陆智祥,虞利群,关心,何海萍,史克倩,赵仁彬,杨同华.  中国实验血液学杂志. 2018(05)
[3]骨髓增殖性疾病相关基因最新研究进展[J]. 肖裕鸿,王一浩,邵宗鸿.  中国实验血液学杂志. 2017(04)



本文编号：3331702