养殖源弧菌耐药性及qnrVC基因介导喹诺酮药物耐药机制研究
发布时间：2021-08-13 11:02
弧菌（Vibrio）属革兰氏阴性菌,分布广泛,部分条件致病菌属于食源性致病菌,严重威胁着水产品安全以及人类健康。目前抗菌药物仍然是治疗弧菌性疾病的主要方法,但随着抗菌药物的不合理使用或者大面积使用,造成弧菌对部分药物产生不同程度的耐药性。因此,需要进行水产养殖源弧菌耐药性监测研究,为有效控制弧菌对抗菌药物的耐药性提供理论依据。为了解上海郊区、江苏、福建以及海南四个地区养殖源弧菌的流行情况及抗菌药物的耐药情况,对采集的菌株进行分离鉴定;其次检测养殖对虾源副溶血弧菌对抗菌药物的敏感性,并检测其耐药基因的携带率,旨在了解四个地区养殖对虾源中副溶血弧菌的流行情况,耐药基因的携带率以及耐药表型与基因型的相关性,为水产养殖中副溶血弧菌的病害防治以及副溶血弧菌中耐药机制的研究提供基础数据;最后对36株副溶血弧菌及采自江苏赣榆的创伤弧菌和鳗弧菌中qnr VC基因进行检测及基因定位,可转移性评价以及基因环境分析,了解qnr VC基因在弧菌中的流行情况,解析qnr VC基因的遗传背景及其转移机制,为水产养殖源耐药弧菌以及耐药基因传播扩散的防控提供基础数据支持。1.养殖源弧菌的流行情况调查本实验从四个地区共...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
弧菌gyrB基因PCR扩增产物Fig2-1.PCRamplificationproductsofgyrBgeneofVibriosp.
上海海洋大学硕士学位论文92.3.1弧菌的分离纯化结果弧菌在TCBS选择性培养基培养之后，显示菌落颜色为绿色，黄色或者黄绿色，呈圆形中间凸起的形态。PCR扩增gyrB基因和HSP60基因，电泳检测（图2-1，2-2）分别得到1040bp和550bp大小的条带。测序结果经NCBI比对之后，与生化鉴定结果相符合。图2-1弧菌gyrB基因PCR扩增产物Fig2-1.PCRamplificationproductsofgyrBgeneofVibriosp.M：DNAMarkerDL2000图2-2弧菌HSP60基因PCR扩增产物Fig2-2.PCRamplificationproductsofHSP60geneofVibriosp.M：DNAMarkerDL20002.3.2弧菌的鉴定结果本实验2017-2019年从上海郊区、江苏、福建及海南等地区患病养殖场分离到的细菌进行鉴定，发病动物包括南美白对虾、锈斑蟳、绿鳍马面鲀、大菱鲆、淡水七彩神仙鱼等水生动物，共鉴定出70株弧菌，涉及弧菌属的10个种（表2-2），其中分离最多的是副溶血弧菌，为36株，占总量的51.4%，其次为哈维氏弧菌，19株，占27%，其余鉴定出来的8种弧菌种数量量比较少。不同地区分离到的弧
上海海洋大学硕士学位论文32dH2O39μL合计50μL4.3.2.3qnrVC9敲除菌株的效果验证检测qnrVC9基因敲除菌株对喹诺酮类药物的MIC值，同时使用PCR方法检测qnrVC基因，方法同4.2，验证qnrVC基因敲除效果。4.4实验结果4.4.1qnrVC基因的检测结果根据第三章中副溶血弧菌检测qnrVC基因的携带情况，结果显示有26株副溶血弧菌携带qnrVC基因，创伤弧菌、鳗弧菌两株弧菌均呈阳性，qnrVC基因经PCR扩增后的电泳结果如图4-1所示。将测序结果在NCBI上进行Blast比对分析，结果显示26株副溶血弧菌阳性中21株携带的是qnrVC6等位基因，5株携带的是qnrVC3等位基因，创伤弧菌和鳗弧菌的qnrVC基因与qnrVC9基因的序列相似度达99%（图4-2-1、图4-2-2）。图4-1部分弧菌qnrVC基因PCR扩增产物Fig2-2.PCRamplificationproductsofqnrVCgeneofsomeVibriosp.M：DNAMarkerDL2000
【参考文献】：
期刊论文
[1]MALDI-TOF-MS检测哈维弧菌前处理条件的探索及聚类分析[J]. 武静,陈英剑,李继霞,胡成进. 国际检验医学杂志. 2020(01)
[2]平湖市市售水产品中致病性弧菌检测结果[J]. 陆飞越,王建华,马春晓,张军,董丽娟. 预防医学. 2020(01)
[3]宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因及耐药性分析[J]. 谢红意,叶鸿雁,周方满,施露梅,葛婷婷,乐旭波. 检验医学. 2019(02)
[4]大菱鲆源鳗弧菌的分离鉴定及药敏分析[J]. 栾林林,张永刚,王凤军,任媛,任海,李强,靳晓敏. 饲料工业. 2018(22)
[5]广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌耐药性和耐药基因的检测[J]. 黄伟德,肖双燕,黎姗梅,黄德生,张振豪,钟昌艳,陈福彩,梁毅,梁静真,黄钧. 西南农业学报. 2018(09)
[6]副溶血弧菌耐药及其机制的研究进展[J]. 张德福,安慧,张健,赵禹宗,张明,郭佳佳,冯娇,刘雪飞,李春,白凤翎,李钰金,殷喆,励建荣. 食品工业科技. 2018(09)
[7]磺胺类抗性基因的产生及演变研究进展[J]. 汪涛,杨再福,陈勇航,孙冉冉,张姚姚,王亚楠. 环境污染与防治. 2017(11)
[8]2016年潍坊市市售动物性水产品中副溶血性弧菌和创伤弧菌污染状况研究[J]. 赵忠俊,于明明,王晓威,肖林,张康,陈婕,梁永柱. 预防医学论坛. 2017(04)
[9]开封市13株创伤弧菌分离株耐药性及PFGE分型研究[J]. 黄淑华,刁保卫,陈磊,刘杰,张春艳,阎学燕,许娇,巩飚. 中国热带医学. 2016(12)
[10]2012年～2014年南海海水养殖鱼类病原菌哈维弧菌分离株的耐药性分析[J]. 蒋魁,徐力文,苏友禄,王雨,郭志勋,许海东,高芳,冯娟. 南方水产科学. 2016(06)
博士论文
[1]食品中弧菌的耐药性和致病性研究[D]. 郑志伟.西北农林科技大学 2019
硕士论文
[1]海水养殖源弧菌耐药性调查及qnrVC基因在弧菌中的流行情况研究[D]. 刘旭.上海海洋大学 2016
[2]海水弧菌耐药性I类整合子分析与副溶血弧菌分子分型研究[D]. 李林桂.四川农业大学 2013
本文编号：3340307
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
弧菌gyrB基因PCR扩增产物Fig2-1.PCRamplificationproductsofgyrBgeneofVibriosp.
上海海洋大学硕士学位论文92.3.1弧菌的分离纯化结果弧菌在TCBS选择性培养基培养之后，显示菌落颜色为绿色，黄色或者黄绿色，呈圆形中间凸起的形态。PCR扩增gyrB基因和HSP60基因，电泳检测（图2-1，2-2）分别得到1040bp和550bp大小的条带。测序结果经NCBI比对之后，与生化鉴定结果相符合。图2-1弧菌gyrB基因PCR扩增产物Fig2-1.PCRamplificationproductsofgyrBgeneofVibriosp.M：DNAMarkerDL2000图2-2弧菌HSP60基因PCR扩增产物Fig2-2.PCRamplificationproductsofHSP60geneofVibriosp.M：DNAMarkerDL20002.3.2弧菌的鉴定结果本实验2017-2019年从上海郊区、江苏、福建及海南等地区患病养殖场分离到的细菌进行鉴定，发病动物包括南美白对虾、锈斑蟳、绿鳍马面鲀、大菱鲆、淡水七彩神仙鱼等水生动物，共鉴定出70株弧菌，涉及弧菌属的10个种（表2-2），其中分离最多的是副溶血弧菌，为36株，占总量的51.4%，其次为哈维氏弧菌，19株，占27%，其余鉴定出来的8种弧菌种数量量比较少。不同地区分离到的弧
上海海洋大学硕士学位论文32dH2O39μL合计50μL4.3.2.3qnrVC9敲除菌株的效果验证检测qnrVC9基因敲除菌株对喹诺酮类药物的MIC值，同时使用PCR方法检测qnrVC基因，方法同4.2，验证qnrVC基因敲除效果。4.4实验结果4.4.1qnrVC基因的检测结果根据第三章中副溶血弧菌检测qnrVC基因的携带情况，结果显示有26株副溶血弧菌携带qnrVC基因，创伤弧菌、鳗弧菌两株弧菌均呈阳性，qnrVC基因经PCR扩增后的电泳结果如图4-1所示。将测序结果在NCBI上进行Blast比对分析，结果显示26株副溶血弧菌阳性中21株携带的是qnrVC6等位基因，5株携带的是qnrVC3等位基因，创伤弧菌和鳗弧菌的qnrVC基因与qnrVC9基因的序列相似度达99%（图4-2-1、图4-2-2）。图4-1部分弧菌qnrVC基因PCR扩增产物Fig2-2.PCRamplificationproductsofqnrVCgeneofsomeVibriosp.M：DNAMarkerDL2000
【参考文献】：
期刊论文
[1]MALDI-TOF-MS检测哈维弧菌前处理条件的探索及聚类分析[J]. 武静,陈英剑,李继霞,胡成进. 国际检验医学杂志. 2020(01)
[2]平湖市市售水产品中致病性弧菌检测结果[J]. 陆飞越,王建华,马春晓,张军,董丽娟. 预防医学. 2020(01)
[3]宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因及耐药性分析[J]. 谢红意,叶鸿雁,周方满,施露梅,葛婷婷,乐旭波. 检验医学. 2019(02)
[4]大菱鲆源鳗弧菌的分离鉴定及药敏分析[J]. 栾林林,张永刚,王凤军,任媛,任海,李强,靳晓敏. 饲料工业. 2018(22)
[5]广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌耐药性和耐药基因的检测[J]. 黄伟德,肖双燕,黎姗梅,黄德生,张振豪,钟昌艳,陈福彩,梁毅,梁静真,黄钧. 西南农业学报. 2018(09)
[6]副溶血弧菌耐药及其机制的研究进展[J]. 张德福,安慧,张健,赵禹宗,张明,郭佳佳,冯娇,刘雪飞,李春,白凤翎,李钰金,殷喆,励建荣. 食品工业科技. 2018(09)
[7]磺胺类抗性基因的产生及演变研究进展[J]. 汪涛,杨再福,陈勇航,孙冉冉,张姚姚,王亚楠. 环境污染与防治. 2017(11)
[8]2016年潍坊市市售动物性水产品中副溶血性弧菌和创伤弧菌污染状况研究[J]. 赵忠俊,于明明,王晓威,肖林,张康,陈婕,梁永柱. 预防医学论坛. 2017(04)
[9]开封市13株创伤弧菌分离株耐药性及PFGE分型研究[J]. 黄淑华,刁保卫,陈磊,刘杰,张春艳,阎学燕,许娇,巩飚. 中国热带医学. 2016(12)
[10]2012年～2014年南海海水养殖鱼类病原菌哈维弧菌分离株的耐药性分析[J]. 蒋魁,徐力文,苏友禄,王雨,郭志勋,许海东,高芳,冯娟. 南方水产科学. 2016(06)
博士论文
[1]食品中弧菌的耐药性和致病性研究[D]. 郑志伟.西北农林科技大学 2019
硕士论文
[1]海水养殖源弧菌耐药性调查及qnrVC基因在弧菌中的流行情况研究[D]. 刘旭.上海海洋大学 2016
[2]海水弧菌耐药性I类整合子分析与副溶血弧菌分子分型研究[D]. 李林桂.四川农业大学 2013
本文编号：3340307
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