柱花草花粉不育基因连锁的SCAR标记研究
发布时间：2021-08-16 23:03
本研究以圭亚那柱花草‘1979’（Stylosanthes guianensis‘1979’,母本,花粉不育）和‘热研2号’柱花草（轮回父本）的BC1F1代群体为材料,利用简单序列重复区间扩增多态性（Inter-simple Sequence Repeat,ISSR）技术,结合集群分组分析法（Bulked Segregate Analysis,BSA）构建花粉育性基因池。结果表明:利用100条ISSR引物筛选出在不育基因池中有特异条带的引物共11条;经BC1F1群体单株验证,有8个标记仅在花粉不育个体中出现,表明其与花粉不育基因连锁;将这8个特异性片段回收、克隆、测序,并分别设计8对特异序列特异扩增区域（Sequenced Charaeterized Amplified Region,SCAR）引物,对BC1F1单株进行验证,发现这8条片段仅在不育个体中扩增出目标条带,表明8 ISSR特异片段成功转化为8个SCAR标记。本研究结果为建立柱花草稳定的雄性不育...
【文章来源】：草地学报. 2020,28(05)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
引物UBC816在BC1F1代分离群体各单株的扩增情况
将上述回收的8条片段进行测序。UBC808-350,UBC816-400,UBC817-300,UBC824-150,UBC836-400,UBC840-200,UBC843-200和UBC8 81-220的测序长度分别为245 bp,442 bp,278 bp,127 bp,335 bp,151 bp,196 bp和173 bp,测序结果与目标片段结果一致。图2为引物UBC816特异片段测序结果,在序列的上下游都找到了引物UBC835自身及其反向互补序列的位置,该片段长度为442 bp。与ISSR引物扩增出的目标片段(400 bp)结果相一致,这也证明回收片段是正确的。根据测序结果,应用DNAMAN软件进行分析,考虑到引物设计的原则,还有引物中GC的含量,尽量减少发卡结构和碱基错配的现象发生,共设计了8对正反链的ISSR-SCAR引物,引物名称及序列见表2。
利用设计的8对ISSR-SCAR引物,对BC1F1群体进行扩增验证,获得较好的扩增效果,在不育群体中均有目标条带,在可育群体中没有目标条带,说明这8个ISSR标记成功转化为SCAR标记。图3为引物ISSR-SCAR03对BC1F1群体的验证结果,从图3中可以看出,3～17号BC1F1代不育群体中均扩增出了与母本相同的442 bp的特异条带,18～32号BC1F1代可育群体中均未扩增出此特异条带,说明此ISSR标记已被成功转化为SCAR标记,是与不育基因连锁的SCAR标记。3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]籽用大麻性别连锁标记的验证及SCAR标记开发[J]. 赵铭森,方书生,陈瑶,康红梅,高金虎,陈思远,杨昕,冯旭平,张立武. 热带作物学报. 2019(10)
[2]工业大麻雄性相关RAPD和SCAR标记的筛选与鉴定[J]. 姜颖,冯乃杰,王晓楠,韩喜财,韩承伟,赵越,曹焜,孙宇峰,李振伟. 作物杂志. 2019(03)
[3]罗汉果性别相关的SCAR标记筛选[J]. 谢文娟,吴钰坡,黄江,刘彦延,林军,莫长明. 北方园艺. 2019(08)
[4]基于SSR标记的柱花草种质资源遗传多样性与群体结构分析[J]. 卞华,申晴,韦海燕,蒋亚君,丁西朋,白昌军. 草业科学. 2019(03)
[5]紫花苜蓿细胞质雄性不育系和保持系SCAR标记的鉴定研究[J]. 周仂,王英哲,谭晶,徐安凯,徐博. 草地学报. 2018(06)
[6]柱花草杂交后代育性分离群体ISSR-PCR反应体系的优化与确立[J]. 张子雄,黄春琼,刘国道,白昌军,唐军,王文强. 分子植物育种. 2018(09)
[7]柱花草花粉不育和可育分离群体基因组DNA分离方法优化[J]. 张子雄,黄春琼,刘国道. 分子植物育种. 2017(09)
[8]南蛇藤雌性性别相关的RAPD和SCAR标记[J]. 魏丽娟,张娟,刘林德,王蕾,赵同欣. 植物研究. 2014(05)
[9]苦瓜抗白粉病SCAR分子标记的开发[J]. 周生茂,尚小红,梁任繁,郭元元,文俊丽,黄皓,陈振东,班美玲,黄如葵. 南方农业学报. 2013(10)
[10]基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究[J]. 周涛,谢宇,张丽艳,魏升华,金艳蕾. 中国中药杂志. 2013(16)
博士论文
[1]大花红景天的ISSR遗传多样性与精油化学成分多样性研究[D]. 雷一东.复旦大学 2004
硕士论文
[1]筛选与桃花粉育性基因连锁的分子标记及SCAR标记的转化[D]. 王成.延边大学 2006
本文编号：3346549
【文章来源】：草地学报. 2020,28(05)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
引物UBC816在BC1F1代分离群体各单株的扩增情况
将上述回收的8条片段进行测序。UBC808-350,UBC816-400,UBC817-300,UBC824-150,UBC836-400,UBC840-200,UBC843-200和UBC8 81-220的测序长度分别为245 bp,442 bp,278 bp,127 bp,335 bp,151 bp,196 bp和173 bp,测序结果与目标片段结果一致。图2为引物UBC816特异片段测序结果,在序列的上下游都找到了引物UBC835自身及其反向互补序列的位置,该片段长度为442 bp。与ISSR引物扩增出的目标片段(400 bp)结果相一致,这也证明回收片段是正确的。根据测序结果,应用DNAMAN软件进行分析,考虑到引物设计的原则,还有引物中GC的含量,尽量减少发卡结构和碱基错配的现象发生,共设计了8对正反链的ISSR-SCAR引物,引物名称及序列见表2。
利用设计的8对ISSR-SCAR引物,对BC1F1群体进行扩增验证,获得较好的扩增效果,在不育群体中均有目标条带,在可育群体中没有目标条带,说明这8个ISSR标记成功转化为SCAR标记。图3为引物ISSR-SCAR03对BC1F1群体的验证结果,从图3中可以看出,3～17号BC1F1代不育群体中均扩增出了与母本相同的442 bp的特异条带,18～32号BC1F1代可育群体中均未扩增出此特异条带,说明此ISSR标记已被成功转化为SCAR标记,是与不育基因连锁的SCAR标记。3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]籽用大麻性别连锁标记的验证及SCAR标记开发[J]. 赵铭森,方书生,陈瑶,康红梅,高金虎,陈思远,杨昕,冯旭平,张立武. 热带作物学报. 2019(10)
[2]工业大麻雄性相关RAPD和SCAR标记的筛选与鉴定[J]. 姜颖,冯乃杰,王晓楠,韩喜财,韩承伟,赵越,曹焜,孙宇峰,李振伟. 作物杂志. 2019(03)
[3]罗汉果性别相关的SCAR标记筛选[J]. 谢文娟,吴钰坡,黄江,刘彦延,林军,莫长明. 北方园艺. 2019(08)
[4]基于SSR标记的柱花草种质资源遗传多样性与群体结构分析[J]. 卞华,申晴,韦海燕,蒋亚君,丁西朋,白昌军. 草业科学. 2019(03)
[5]紫花苜蓿细胞质雄性不育系和保持系SCAR标记的鉴定研究[J]. 周仂,王英哲,谭晶,徐安凯,徐博. 草地学报. 2018(06)
[6]柱花草杂交后代育性分离群体ISSR-PCR反应体系的优化与确立[J]. 张子雄,黄春琼,刘国道,白昌军,唐军,王文强. 分子植物育种. 2018(09)
[7]柱花草花粉不育和可育分离群体基因组DNA分离方法优化[J]. 张子雄,黄春琼,刘国道. 分子植物育种. 2017(09)
[8]南蛇藤雌性性别相关的RAPD和SCAR标记[J]. 魏丽娟,张娟,刘林德,王蕾,赵同欣. 植物研究. 2014(05)
[9]苦瓜抗白粉病SCAR分子标记的开发[J]. 周生茂,尚小红,梁任繁,郭元元,文俊丽,黄皓,陈振东,班美玲,黄如葵. 南方农业学报. 2013(10)
[10]基于SCAR分子标记的头花蓼分子鉴定研究[J]. 周涛,谢宇,张丽艳,魏升华,金艳蕾. 中国中药杂志. 2013(16)
博士论文
[1]大花红景天的ISSR遗传多样性与精油化学成分多样性研究[D]. 雷一东.复旦大学 2004
硕士论文
[1]筛选与桃花粉育性基因连锁的分子标记及SCAR标记的转化[D]. 王成.延边大学 2006
本文编号：3346549
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